Anticorpo Monoclonal Coelho Anti-NEK7 para WB, ELISA - Q8TDX7

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da NEK7

• A NEK7 (quinase relacionada a NIMA 7) é uma serina/treonina-proteína quinase que desempenha um papel essencial na progressão do ciclo celular mitótico, incluindo a nucleação de microtúbulos do centrossoma, formação do fuso mitótico e citocinese.

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• Fosforila alvos a jusante, como a EML4 na Ser-146, promovendo sua dissociação dos microtúbulos para uma congregação cromossómica eficiente, e a RPS6KB1.

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• Além da mitose, a NEK7 serve como um ativador crítico do inflamassoma NLRP3, desbloqueando o NLRP3 no centro organizador de microtúbulos (MTOC) e permitindo a ativação da CASP1 independentemente da sua atividade quinase.

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• A interação da NEK7 com a NEK9 impõe exclusividade mútua entre a ativação do inflamassoma e a divisão celular, atuando como um interruptor celular.

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• Subcelularmente, a NEK7 localiza-se no núcleo, citoplasma, polos do fuso, centrossomas e MTOC.

• É altamente expressa em pulmão, músculo, testículo, cérebro, coração, fígado, leucócitos e baço, com expressão mais baixa em ovário, próstata e rim; ausente no intestino delgado.

• Características estruturais e regulatórias-chave incluem um domínio quinase de ligação a ATP, sítios de ligação a metais e modificações pós-traducionais como acetilação e fosforilação.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio cobre uma região conservada (aa 203-302) da NEK7 humana; espera-se detectar a proteína endógena ~35 kDa em WB com amostras humanas, de rato e ratazana devido à alta homologia de sequência.
• Para WB, considere usar lisados celulares totais de linhas celulares comumente disponíveis (ex.: HeLa, HEK293T, Jurkat) como controles positivos e valide com amostras de knockdown ou knockout específicas para confirmar a identidade da banda.
• Para ELISA, a proteína ou peptídeo recombinante NEK7 pode ser usado como antigénio de revestimento; faça titulação do anticorpo para determinar a concentração de trabalho ideal no seu sistema de ensaio.
• Ao estudar vias relacionadas ao inflamassoma, inclua tratamentos de ativação apropriados (ex.: priming com LPS + nigericina) para avaliar o papel da NEK7; note que a sua função na ativação do NLRP3 é independente da atividade quinase.
• Dada a sua localização nuclear e citoplasmática, o fracionamento subcelular pode ser empregue para enriquecer compartimentos específicos antes da deteção.

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