Anticorpo Monoclonal Anti-NF-kB p65/RelA para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA, ChIP - Q04206

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do NF-kB p65/RelA

• A subunidade NF-kB p65 (também conhecida como RELA, NFKB3) é um componente central do complexo do fator de transcrição NF-kappa-B, um regulador pleiotrópico presente em quase todos os tipos de células.
• Os complexos NF-kappa-B são homodímeros ou heterodímeros formados por proteínas que contêm o domínio REL; o heterodímero de RELA e NFKB1 (p50) é a forma mais abundante e atua como um ativador transcricional.
• RELA/p65 desempenha um papel central nas respostas inflamatórias e imunes, bem como na diferenciação celular, proliferação, apoptose e tumorigénese, ligando-se aos locais kappa-B nos promotores de genes alvo.
• Em células não estimuladas, os dímeros NF-kappa-B são retidos no citoplasma por inibidores (I-kappa-B); após a ativação, o I-kappa-B é fosforilado e degradado, permitindo que a RELA se transloque para o núcleo para regular a expressão génica.
• A RELA está sujeita a extensas modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, fosforilação, metilação, S-nitrosilação e ubiquitinação, que afinam a sua atividade, estabilidade e interações.
• A RELA é essencial para a expressão de genes de citocinas em células T, conforme demonstrado por estudos funcionais. Referências relacionadas: PMID:15790681
• A RELA foi identificada como um fator de transcrição chave que regula a resposta ao interferão durante a infeção por SARS-CoV-2. Referências relacionadas: PMID:33440148
• A proteína localiza-se principalmente no núcleo e no citoplasma, com trânsito dinâmico entre estes compartimentos dependendo do estado de ativação.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blot (WB), espera-se uma banda específica em torno de 60 kDa, consistente com o peso molecular calculado do NF-kB p65.
• Para IHC-P e IF/ICC, recomenda-se a validação no tecido ou sistema celular relevante; a recuperação de antigénio pode ser necessária para secções incluídas em parafina.
• Os dados de validação por KO indicam especificidade para a RELA endógena; aconselha-se os utilizadores a incluir controlos apropriados (por exemplo, lisados de células knockout) nos seus experimentos.
• Em ensaios de ChIP, o anticorpo reconhece o NF-kB p65 nativo ligado à cromatina; as condições ideais de fixação e cisalhamento devem ser determinadas empiricamente.
• Embora o anticorpo esteja listado para múltiplas aplicações, as condições individuais do ensaio (por exemplo, diluição, tempo de incubação) devem ser otimizadas no laboratório do utilizador final.

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