Anticorpo monoclonal anti-NFKB1 para WB, IHC-P, IP, ELISA, CHIP - P19838

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização de NF-kB

• NF-κB é um fator de transcrição pleiotrópico presente em praticamente todos os tipos celulares, atuando como ponto final de cascatas de sinalização desencadeadas por diversos estímulos e regulando processos como inflamação, imunidade, diferenciação, crescimento celular, tumorigênese e apoptose.
• NF-κB atua como complexos homodiméricos ou heterodiméricos formados por proteínas que contêm domínios semelhantes a Rel, incluindo RELA/p65, RELB, NFKB1/p105, NFKB1/p50, REL e NFKB2/p52; o heterodímero p65-p50 é a forma mais abundante.
• NFKB1 codifica um precursor de 105 kDa (p105), que sofre processamento cotraducional mediado pelo proteassoma para gerar a subunidade ativa de 50 kDa (p50), responsável pela ligação ao DNA. Referências relacionadas: PMID:1423592
• A subunidade p50 associa-se a RELA/p65 para formar o heterodímero NF-κB p65-p50, que se liga ao sítio κB consenso 5′-GGRNNYYCC-3′ nas regiões intensificadoras dos genes envolvidos na resposta imune e na reação de fase aguda. Referências relacionadas: PMID:1740106, PMID:7830764
• Enquanto os heterodímeros p65-p50 e RelB-p50 atuam como ativadores transcricionais, o homodímero p50-p50 funciona como repressor, mas pode passar a atuar como ativador quando associado a BCL3.
• NFKB1/p105 também atua como molécula de retenção citoplasmática para as proteínas NF-κB associadas, mantendo-as inativas no citoplasma; sua degradação pelo sistema ubiquitina-proteassoma libera MAP3K8 ativo para propagar a sinalização MAPK.
• A localização subcelular é dinâmica: os complexos NF-κB permanecem principalmente no citoplasma em estado inativo, ligados aos inibidores IκB, e translocam-se para o núcleo após a ativação.
• Modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação, hidroxilação e ubiquitinação, regulam a atividade, a estabilidade e as interações de NFKB1.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• Para Western blot, o fracionamento nuclear e citoplasmático pode ajudar a distinguir as bandas p105 (105 kDa) e p50 (50 kDa); valide com controles de carregamento apropriados.
• Na IHC-P, considere otimizar a recuperação antigênica e validar os padrões de coloração com controles positivos conhecidos para NF-κB (por exemplo, tecidos imunes) e controles negativos.
• Para CHIP, verifique se o anticorpo consegue enriquecer regiões promotoras que contêm sítios κB; recomenda-se realizar experimentos-piloto com loci genômicos positivos (por exemplo, TNFA) e negativos.
• Como o imunógeno é um peptídeo sintético, a reatividade cruzada com outros membros da família NF-κB deve ser avaliada por knockdown com siRNA ou por competição com o peptídeo imunizante.

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