Anticorpo Policlonal Anti-NFKB1 para WB, IHC-P, IF/ICC, IP, ELISA - P19838

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do NFKB1

• O NFKB1 codifica o precursor p105, que é processado na subunidade ativa p50. A p105 funciona como um fator de retenção citoplasmática para proteínas NF-kappa-B, enquanto a p50 constitui o complexo ativo NF-kappa-B com a RELA/p65. Referências relacionadas: PMID:1423592

• O NF-kappa-B é um fator de transcrição pleiotrópico envolvido na inflamação, imunidade, crescimento celular, tumorigénese e apoptose. Existe como homodímeros ou heterodímeros de proteínas contendo o domínio Rel-like, sendo o heterodímero p65-p50 a forma mais abundante.

• O complexo NF-kappa-B p65-p50 liga-se especificamente à sequência de consenso kappa-B 5'-GGRNNYYCC-3' nas regiões de potenciador dos genes alvo, regulando respostas imunes e de fase aguda. Referências relacionadas: PMID:1740106, PMID:7830764

• O NFKB1 localiza-se tanto no citoplasma como no núcleo, com os complexos inativos NF-kappa-B retidos no citoplasma por inibidores I-kappa-B. Após estimulação, o I-kappa-B é fosforilado e degradado, permitindo a translocação nuclear do NF-kappa-B.

• Modificações pós-traducionais, como fosforilação, acetilação e ubiquitinação, regulam a atividade do NF-kappa-B.

• O homodímero p50-p50 atua como um repressor transcricional, mas pode tornar-se um ativador quando associado ao BCL3.

• O NFKB1 também desempenha um papel na repressão da sinalização MAPK através da formação de complexos com a MAP3K8; a degradação dependente do proteassoma da p105 liberta a MAP3K8 ativa.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio corresponde aos aminoácidos 740-964 do NFKB1, que se localiza na região C-terminal da p105. Portanto, espera-se que o anticorpo detete o precursor p105 de comprimento total (~105 kDa) em vez da subunidade processada p50. Considere isto ao conceber experiências para distinguir a p105 da p50.
• Para o Western blot, antecipa-se uma banda a aproximadamente 105 kDa. Otimize os controlos de carga e a diluição do anticorpo para o seu sistema de amostras.
• Na imunoprecipitação, valide a capacidade do anticorpo para capturar complexos nativos de NFKB1 em condições não desnaturantes.
• Para IHC-P e IF/ICC, confirme a localização subcelular (citoplasmática vs. nuclear) em condições basais e estimuladas para refletir o estado de ativação do NF-kappa-B.
• As aplicações de ELISA podem exigir a titulação do anticorpo contra o antigénio recombinante ou lisados celulares para estabelecer uma concentração de trabalho adequada.

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