Anticorpo Policlonal Anti-NLRC4 para WB - Q3UP24

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do NLRC4

• NLRC4 (proteína 4 da família NLR contendo domínio CARD) também é conhecido como Ipaf, CARD12, CLAN, entre outros alias; é um componente chave dos inflamassomas que ativam respostas imunes inatas contra patógenos intracelulares.
• A proteína atua como um sensor que monta o complexo do inflamassoma NLRC4 após o reconhecimento indireto de componentes bacterianos e fúngicos, levando à ativação da caspase-1, produção de citocinas pró-inflamatórias (por exemplo, IL-1β) e piroptose de macrófagos.
• NLRC4 funciona em cooperação com proteínas da família NAIP (NAIP1, NAIP2, NAIP5), que se ligam diretamente a ligantes específicos derivados de patógenos como flagelina, proteínas do bastão do T3SS (por exemplo, PrgJ) e proteínas da agulha do T3SS, desencadeando assim a montagem do inflamassoma NLRC4.
• O inflamassoma NLRC4 é fundamental para a defesa do hospedeiro contra bactérias Gram-negativas como Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Legionella pneumophila e Pseudomonas aeruginosa, além do patógeno fúngico Candida albicans.
• Na mucosa intestinal, NLRC4 distingue entre bactérias comensais e patogênicas, induzindo a secreção protetora de IL-1β especificamente em resposta a patógenos como Salmonella ou P. aeruginosa.
• Subcelularmente, NLRC4 se localiza no citosol e pode formar pontos (specks) de inflamassoma após a ativação.
• Expressão tecidual: NLRC4 é expresso por fagócitos mononucleares intestinais, o que destaca seu papel na imunidade da mucosa.
• A proteína apresenta um domínio C-terminal de repetição rica em leucina (LRR), um domínio central de ligação a nucleotídeos (NBD/NACHT) com atividade de ligação a ATP, e um domínio CARD N-terminal; ele sofre fosforilação durante a ativação do inflamassoma.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno utilizado para este anticorpo policlonal corresponde aos aminoácidos 71-170 do NLRC4 de camundongo. Esta região está localizada dentro do domínio N-terminal, o que pode proporcionar reatividade cruzada com ortólogos de humano e rato devido à conservação da sequência. Valide a reatividade cruzada na sua configuração experimental específica.
• O peso molecular previsto do NLRC4 é de aproximadamente 116 kDa. Para Western blotting, considere usar um gel de porcentagem adequada e condições de transferência, e inclua controles positivos, como linhagens de células de macrófago (por exemplo, J774, RAW 264.7) estimuladas para induzir a expressão de NLRC4.
• Em aplicações de imunofluorescência (IF) ou IF-P, NLRC4 é tipicamente citosólico em condições de estado estacionário, mas pode formar pontos (specks) puntiformes de inflamassoma após estimulação. A co-coloração com ASC ou caspase-1 pode ajudar a visualizar inflamassomas ativados.
• Para aplicações de ELISA, este anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção após validação apropriada do pareamento. Faça a titulação e teste nas condições do seu ensaio.

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