Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-NLRP3 para WB, IP, ELISA - Q96P20

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do NLRP3

• NLRP3 (proteína 3 contendo domínios NACHT, LRR e PYD), também conhecido como criopirina, é um receptor de reconhecimento de padrões citosólico que atua como componente sensor do inflamassoma NLRP3. Referências relacionadas: PMID:16407889, PMID:18403674, PMID:18604214
• Após ativação por patógenos, cristais ou partículas ambientais, o NLRP3 oligomeriza e recruta ASC e pró-caspase-1, formando um complexo de inflamassoma que promove a ativação da caspase-1; isso leva ao clivagem e secreção das citocinas pró-inflamatórias IL-1β e IL-18, bem como à piroptose mediada por gasdermina D. Referências relacionadas: PMID:23582325, PMID:28847925, PMID:31189953
• O inflamassoma NLRP3 também impulsiona a secreção não convencional da alarmina HMGB1, amplificando as respostas inflamatórias. Referências relacionadas: PMID:22801494
• Sob condições de repouso, o NLRP3 é mantido em um estado autoinibido ligado a ADP; diversos estímulos que induzem efluxo de K+ e perturbação da membrana desencadeiam sua ativação conformacional. Referências relacionadas: PMID:35114687
• Após a ativação, o NLRP3 é transportado para o centro organizador de microtúbulos (MTOC), onde é desbloqueado pela NEK7, e então se relocaliza para vesículas dispersas da rede trans‑Golgi (dTGN) ligando-se ao fosfatidilinositol 4‑fosfato (PtdIns4P), levando à montagem do inflamassoma ativo. Referências relacionadas: PMID:36442502, PMID:39173637
• Independente de seu papel no inflamassoma, o NLRP3 pode atuar como um regulador transcricional em células T auxiliares 2 (Th2), ligando-se ao DNA e promovendo a expressão de IL-4 para impulsionar a diferenciação Th2, com implicações para asma alérgica e crescimento tumoral.
• Subcelularmente, o NLRP3 localiza-se no citosol, mitocôndrias, retículo endoplasmático, aparelho de Golgi e pode ser secretado; é predominantemente expresso em macrófagos, células dendríticas e barreiras epiteliais, com níveis mais baixos em monócitos e osteoblastos.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 100–210 próximos ao domínio PYD N-terminal do NLRP3 humano; considere que o anticorpo pode reconhecer um epítopo nesta região, o que pode ser relevante ao avaliar construções truncadas ou mutantes.
• Para Western blot, valide o anticorpo usando lisados de macrófagos humanos ou células mononucleares do sangue periférico, onde a expressão de NLRP3 é conhecida; uma banda em ~118 kDa é esperada.
• Em experimentos de imunoprecipitação, garanta condições de lise otimizadas para preservar a integridade do complexo NLRP3, pois o alvo interage com múltiplas proteínas no inflamassoma.
• Para aplicações de ELISA, titulações preliminares em tabuleiro de xadrez com NLRP3 recombinante ou lisados celulares são aconselhadas para estabelecer concentrações ótimas de revestimento e detecção.
• Como a ativação do NLRP3 pode envolver modificações pós-traducionais (ex., ubiquitinação, fosforilação), considere tratar células com estímulos apropriados (ex., LPS + nigericina) para observar mudanças nos padrões de detecção.

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