Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-nNOS para WB, IF/ICC, IF-P, ELISA - P29475

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da nNOS

• A nNOS (Óxido Nítrico Sintase 1) é uma enzima constitutiva responsável principalmente pela produção de óxido nítrico (NO) nos neurônios, onde o NO atua como neurotransmissor e mensageiro retrógrado no sistema nervoso.
• Além da sinalização neuronal, a nNOS apresenta atividade de S-nitrosilase de peptidil-cisteína, mediando a S-nitrosilação de cisteínas em proteínas-alvo citoplasmáticas, como a SRR, contribuindo assim para a regulação pós-traducional.
• Codificada pelo gene NOS1, a nNOS apresenta múltiplas isoformas decorrentes de splicing alternativo; a Isoforma 1 é expressa ubiquamente (cérebro, músculo esquelético, testículos, pulmões e rins), enquanto a Isoforma 3 é específica dos testículos e a Isoforma 4 é detectada nos testículos, músculo esquelético, pulmões e rins.
• Subcelularmente, a nNOS localiza-se na membrana celular, incluindo o sarcolema nas células musculares, e nas espinhas dendríticas dos neurônios, posicionando-se para uma sinalização precisa.
• A proteína é uma flavoproteína contendo heme que se liga à calmodulina, FAD, FMN, NADPH e ferro, necessitando de múltiplos cofatores para sua atividade oxidorredutase.
• As modificações pós-traducionais incluem fosforilação e ubiquitinação, que podem regular sua atividade, estabilidade ou localização.
• Como enzima fundamental na sinalização do óxido nítrico, a nNOS está implicada na neurotransmissão, plasticidade sináptica e contratilidade muscular.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde a um peptídeo C-terminal (aa 1335–1434), uma região conservada entre humanos, camundongos e ratos, em concordância com a reatividade cruzada relatada; considere o alinhamento de sequências se for utilizado em outras espécies.
• Para Western blot (WB), o alto peso molecular da nNOS (~161 kDa) pode exigir tempos de transferência prolongados e uma porcentagem de gel otimizada; valide a detecção em lisados de tecidos ou células relevantes.
• Em aplicações de imunofluorescência (IF), espere marcação na membrana celular, no sarcolema ou nas espinhas dendríticas; a coloração simultânea com marcadores específicos de compartimentos pode auxiliar na localização.
• Para ELISA, protocolos padrão baseados em peptídeos ou proteínas devem ser aplicáveis; verifique a especificidade utilizando nNOS recombinante ou um ensaio competitivo de bloqueio com peptídeo caso haja preocupação com sinais inespecíficos.
• Como anticorpo monoclonal de coelho, oferece alta consistência entre lotes; ainda assim, cada novo lote deve ser titulado no sistema de ensaio pretendido.

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