Anticorpo Policlonal Anti-Notch1 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P46531

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Notch1

• A Notch1 (proteína homóloga ao locus neurogênico notch 1) é uma proteína transmembrana tipo I de passagem única, também conhecida como proteína notch associada à translocação TAN-1, codificada pelo gene NOTCH1 em humanos.
• Atua como receptor para ligantes ligados à membrana Jagged-1 (JAG1), Jagged-2 (JAG2) e Delta-1 (DLL1), desempenhando um papel central na determinação do destino celular, diferenciação, proliferação e apoptose.
• Após a ativação pelo ligante, o domínio intracelular da notch (NICD) é liberado e forma um complexo ativador transcricional com RBPJ/RBPSUH para regular genes-alvo a jusante, incluindo aqueles do locus enhancer of split.
• Envolvida em múltiplos processos de desenvolvimento: angiogênese (regulação negativa da proliferação e migração de células endoteliais), maturação tímica de células CD4+ e CD8+, diferenciação folicular, desenvolvimento cerebelar via DNER e determinação da simetria esquerda/direita através do equilíbrio ciliar no organizador esquerdo-direito.
• Reprime a diferenciação neuronal e miogênica; pode aumentar a função da HIF1A ao sequestrar a HIF1AN; necessária para a astrogênese protetora mediada por THBS4 após lesão.
• A localização subcelular inclui a membrana celular, membrana do endossomo tardio e núcleo, consistente com seus papéis de sinalização e transcricionais.
• Expressa no baço fetal, tronco cerebral e pulmão; em adultos, encontrada predominantemente em tecidos linfoides.
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação, formação de pontes dissulfeto, hidroxilação e fosforilação; a proteína está sujeita a processamento proteolítico e ubiquitinação.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 2456-2555 da Notch1 humana (NP_060087.3), localizados no domínio citoplasmático. Esta região é conservada entre humanos, camundongos e ratos, suportando a reatividade cruzada relatada.
• Para Western blotting, recomenda-se um padrão de alto peso molecular e um gel de poliacrilamida de baixa porcentagem (por exemplo, 6–8%) devido ao grande tamanho da proteína (273 kDa). Tempos de transferência prolongados podem ser necessários para uma transferência eficiente para a membrana.
• Valide o anticorpo em um sistema de amostra adequado, como HeLa, Jurkat ou outras linhagens celulares conhecidas por expressar Notch1. Um tecido de controle positivo, como baço ou tronco cerebral, pode ser apropriado para IHC-P.
• Para imuno-histoquímica (parafina), a recuperação de antígeno usando tampão citrato mediado por calor (pH 6,0) ou tampão EDTA (pH 9,0) pode ser considerada, embora as condições ideais devam ser determinadas experimentalmente.
• Em IF/ICC, sugere-se a permeabilização com Triton X-100 ou saponina para detectar epítopos intracelulares, uma vez que o imunógeno está dentro da cauda citoplasmática.
• A Notch1 sofre processamento proteolítico; múltiplas bandas podem ser observadas no WB. O precursor de comprimento total (~300 kDa) e as formas transmembrana/citoplasmáticas processadas (~120 kDa e ~110 kDa) podem ser detectados, dependendo do tipo celular e do estado de ativação.

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