Anticorpo Policlonais Anti-NOX2/gp91phox para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P04839

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de NOX2/gp91phox

• NADPH oxidase 2 (NOX2), também conhecido como gp91phox, é a subunidade catalítica do complexo NADPH oxidase dos fagócitos, uma enzima essencial para a imunidade inata.
• Catalisa a transferência de elétrons do NADPH citosólico para o oxigênio molecular para produzir ânion superóxido, uma espécie reativa de oxigênio essencial para a eliminação microbiana. Referências relacionadas: PMID:15338276 PMID:36241643 PMID:36413210
• A transferência de elétrons ocorre via flavina adenina dinucleotídeo (FAD) e duas moléculas de heme, culminando em uma reação de esfera externa que gera o superóxido. Referências relacionadas: PMID:38355798
• A ativação envolve a ligação dependente de fosforilação do NCF1/p47-phox citosólico ao C-terminal de CYBA/p22-phox, levando à montagem do complexo ativo na membrana plasmática ou na membrana fagossomal. Referências relacionadas: PMID:19028840 PMID:38355798
• Localiza-se principalmente na membrana plasmática e nas membranas fagossomais, o que o posiciona para o controle espacial da produção de espécies reativas de oxigênio.
• É expresso predominantemente em neutrófilos, o que é consistente com seu papel na explosão oxidativa dos fagócitos profissionais.
• Mutações no gene CYBB que codifica NOX2 estão associadas à doença granulomatosa crônica ligada ao X, uma imunodeficiência caracterizada por explosão respiratória prejudicada e infecções recorrentes.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde a uma região citoplasmática de NOX2 (aa 385–570), o que indica que o anticorpo pode reconhecer tanto conformações desnaturadas quanto nativas; avalie sua adequação para WB e imunofluorescência com base na preparação da sua amostra.
• Para WB, o peso molecular previsto é de ~65 kDa para o precursor; a glicoproteína madura pode migrar em ~91 kDa. Valide a banda observada no seu lisado específico e inclua controles adequados.
• Em IHC-P e IF/ICC, é esperada coloração de membrana e fagossomal. A permeabilização adequada é necessária para o acesso ao epítopo intracelular; otimize as condições de fixação e permeabilização.
• Para ELISA, o revestimento com peptídeo ou proteína recombinante pode ser usado para capturar o anticorpo. Avalie o buffer de revestimento, as condições de bloqueio e a titulação do anticorpo para estabelecer uma relação sinal-ruído ideal.
• A reatividade cruzada com camundongo e rato indica conservação do epítopo; valide a especificidade nestas espécies usando tecido de knockout ou competição com peptídeo.
• Estudos funcionais podem envolver a estimulação de fagócitos (por exemplo, com PMA) para observar translocação ou detecção aumentada; garanta controles adequados para o estado de ativação.

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