Anticorpo policlonal de coelho anti-NPAS2 para WB, IF/ICC, ELISA - Q99743

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do NPAS2

• NPAS2 (proteína 2 contendo o domínio PAS neuronal), também conhecido como MOP4, bHLHe9 ou PASD4, é um fator de transcrição básico-hélice-alça-hélice-PAS que constitui um componente central do relógio circadiano. Atua como um ativador transcricional no braço positivo do circuito de retroalimentação do relógio molecular.
• A proteína forma heterodímeros com BMAL1 (ou BMAL2) e liga-se a elementos E-box (5'-CACGTG-3') nos promotores de genes controlados pelo relógio, promovendo a transcrição rítmica dos repressores centrais do relógio (PER1/2/3, CRY1/2) e de alvos a jusante envolvidos no metabolismo, sono e outros processos fisiológicos.
• NPAS2 desempenha um papel crítico na manutenção dos comportamentos circadianos sob condições normais de luz/escuridão e alimentação, bem como na sincronização do comportamento alimentar com a disponibilidade programada de alimentos. Também contribui para a homeostase do sono e para a regulação de comportamentos semelhantes à ansiedade por meio da modulação diurna da expressão do receptor GABARA1 no cérebro.
• Além do relógio central, NPAS2 regula a transcrição gênica em tecidos periféricos, como o fígado, controlando vias metabólicas importantes. Também está envolvido na resposta a danos no DNA, regulando genes do ciclo celular e do reparo do DNA.
• O heterodímero NPAS2-BMAL1 participa de um circuito de retroalimentação secundário ao ativar os receptores nucleares NR1D1/2 e RORA/B/G, que, por sua vez, reprimem e ativam a transcrição de BMAL1, respectivamente, contribuindo para a robustez circadiana.
• Subcelularmente, NPAS2 localiza-se no núcleo, em concordância com seu papel como fator de transcrição. Contém domínios PAS de ligação ao heme, e a ligação ao heme pode influenciar sua atividade.
• Modificações pós-traducionais e interações proteicas são fundamentais para determinar a periodicidade circadiana, e alterações nos ritmos mediados por NPAS2 estão implicadas em doenças cardiovasculares, câncer, síndromes metabólicas e envelhecimento.
• A proteína é expressa ubiquitariamente, com funções proeminentes no núcleo supraquiasmático (SCN) do cérebro (o relógio central) e em osciladores periféricos.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno deste anticorpo policlonal de coelho corresponde a uma sequência dentro dos aminoácidos 45 – 240 do NPAS2 humano (NP_002509.2), uma região que engloba parte do domínio bHLH N-terminal e o primeiro domínio PAS. Esse desenho pode conferir reatividade às formas nativas e desnaturadas.
• Para Western blotting, espera-se uma banda em torno de 92 kDa. Considere o uso de condições redutoras e protocolos padrão de SDS-PAGE. Como o NPAS2 sofre ciclagem circadiana, o horário de coleta das amostras deve ser rigorosamente controlado para capturar a expressão ideal.
• Ao realizar imunofluorescência/imunocitoquímica, o NPAS2 normalmente apresenta localização nuclear. Os métodos de fixação e permeabilização devem ser otimizados para alvos nucleares, e a co-coloração com um marcador nuclear pode confirmar a especificidade.
• Em aplicações de ELISA, valide o anticorpo no sistema de amostra relevante e inclua controles apropriados para avaliar o background. Anticorpos policlonais podem apresentar variabilidade entre lotes; portanto, recomenda-se o rastreamento consistente dos lotes.
• Foi relatada reatividade cruzada com NPAS2 de camundongo e rato; no entanto, recomenda-se o alinhamento das sequências da região do imunógeno para estimar a reatividade em outras espécies. Para cada nova espécie ou aplicação, a validação empírica é essencial.

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