Anticorpo Policlonal Anti-NSUN2 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q08J23

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do NSUN2

• O NSUN2, também conhecido como MISU, MRT5, SAKI ou TRM4, é uma RNA citosina C(5)-metiltransferase que catalisa a formação de 5-metilcitosina (m5C) em várias espécies de RNA, incluindo tRNAs, mRNAs e RNAs longos não codificantes. Referências relacionadas: PMID:17071714 PMID:22995836 PMID:31199786
• Metila resíduos de citosina específicos em precursores de tRNA: posições 34 e 48 do tRNA(Leu)(CAA) contendo íntron e posições 48–50 do tRNA(Gly)(GCC), uma modificação essencial para a estabilidade do tRNA e geração de fragmentos derivados de tRNA. Referências relacionadas: PMID:17071714 PMID:22995836 PMID:31199786
• Em mRNAs, a metilação m5C mediada pelo NSUN2 recruta a proteína YBX1, que se liga a transcritos modificados e os protege da degradação, aumentando assim a estabilidade do mRNA. Referências relacionadas: PMID:22395603 PMID:31358969 PMID:34556860
• As modificações m5C no mRNA também facilitam a exportação nuclear através do reconhecimento pela proteína adaptadora ALYREF/THOC4, ligando a metilação ao tráfego nucleocitoplasmático de transcritos. Referências relacionadas: PMID:28418038
• O NSUN2 metila RNAs de cofre não codificantes (vtRNAs), como o VTRNA1.1, promovendo seu processamento em pequenos RNAs regulatórios (svRNA4) que controlam a diferenciação epidérmica. Referências relacionadas: PMID:23871666 PMID:31186410
• Também tem como alvo tRNAs mitocondriais para metilação C5, estendendo seu papel regulatório à expressão gênica mitocondrial. Referências relacionadas: PMID:31276587
• Subcelularmente, o NSUN2 é encontrado no nucléolo, nucleoplasma, citoplasma, mitocôndrias e no fuso mitótico, e é secretado via exossomos, refletindo seus diversos compartimentos funcionais.
• Expresso no cérebro adulto e fetal e em células linfoblastoides, o NSUN2 está associado a processos-chave como ciclo celular, diferenciação e espermatogênese; mutações estão ligadas à deficiência intelectual.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blotting, considere carregar 20–50 µg de lisado proteico total; a banda endógena do NSUN2 aparece em aproximadamente 86 kDa. Otimize o bloqueio e a diluição do anticorpo primário para sua amostra.
• Em imuno-histoquímica (seções de parafina), é recomendada a recuperação de antígeno induzida por calor (por exemplo, tampão citrato, pH 6,0); titule o anticorpo para obter coloração específica.
• Para imunofluorescência, teste a fixação com paraformaldeído a 4% e a permeabilização com Triton X-100 a 0,1%. Inclua controles apropriados para confirmar a localização.
• Este anticorpo apresenta reatividade cruzada com NSUN2 de camundongo e rato, de acordo com dados do fornecedor; valide a especificidade na espécie e tecido de interesse usando modelos de knock-out ou knockdown.
• O imunógeno abrange os aminoácidos 617–708 (região C-terminal); esteja ciente de que o soro policlonal pode reconhecer múltiplas isoformas ou produtos de degradação.
• Para aplicações de ELISA, otimize a concentração do antígeno de revestimento e a diluição do anticorpo, e inclua poços de controle negativo para avaliar o fundo.

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