Anticorpo Policlonal Anti-OTOF para WB, ELISA - Q9HC10

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Otoferlina

• A Otoferlina (proteína semelhante a Fer-1, 2) é uma proteína com múltiplas isoformas; a isoforma 1 e a 3 são expressas no cérebro adulto, enquanto a isoforma 2 é encontrada no feto e no cérebro adulto, coração, placenta, músculo esquelético e rim.
• Funciona como um sensor de cálcio chave nas sinapses em fita das células ciliadas internas da cóclea (IHCs), desencadeando a exocitose de vesículas sinápticas e a libertação de neurotransmissores ao interagir com proteínas SNARE pré-sinápticas de forma dependente de cálcio.
• Também é essencial para a exocitose sináptica nas células ciliadas externas imaturas (OHCs) e pode desempenhar um papel na reciclagem de endossomas.
• Pertence à família de proteínas ferlina, caracterizada por múltiplos domínios C2 que medeiam interações membranares dependentes de cálcio.
• Localiza-se subcelularmente na vesícula citoplasmática, membrana da vesícula sináptica, membrana celular basolateral, membrana do retículo endoplasmático, membrana do aparelho de Golgi, membrana celular pré-sináptica, membrana celular e rede trans-Golgi.
• Contém regiões transmembranares e uma âncora de sinal, fixando-a às membranas das vesículas sinápticas e da membrana plasmática pré-sináptica.
• Associada à surdez genética: mutações causam perda auditiva autossómica recessiva não sindrómica (DFNB9) e distúrbio do espectro da neuropatia auditiva.
• Modificações pós-traducionais e características estruturais incluem ligação de metais, regiões em hélice α (coiled-coil) e múltiplos domínios C2 para ligação de cálcio, cruciais para a função sináptica.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para WB, devido ao grande tamanho da proteína (~227 kDa), use géis SDS-PAGE de baixa percentagem e tempos de transferência prolongados; verifique em lisados de tecidos humanos apropriados (por exemplo, cérebro, tecido coclear).
• Para ELISA, a região do imunogénio (N-terminal 1-300) pode ser usada para capturar ou detetar a otoferlina; considere emparelhar com outro anticorpo que visa um epítopo distinto para ELISA sanduíche.
• Valide a especificidade do anticorpo no sistema de amostras relevante, uma vez que a expressão da otoferlina é específica do tecido e as isoformas variam; lisados de cérebro humano ou linhas de células transfectadas são controlos positivos adequados.
• Como a otoferlina é uma proteína de vesícula sináptica, a fracionamento subcelular pode enriquecer o sinal nas frações membranares.

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