Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-OTUB1 para WB, IF/ICC, ELISA - Q96FW1

Especificações e Parâmetros Essenciais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da OTUB1

• A OTUB1 é uma enzima desubiquitinante que hidrolisa especificamente cadeias de poliubiquitina ligadas por 'Lys-48', desempenhando um papel fundamental na renovação e degradação proteica (PubMed:12401499, 12704427, 14661020). Referências relacionadas: PMID:12401499 PMID:12704427 PMID:14661020
• O gene codifica duas isoformas por meio de splicing alternativo: a isoforma 1 (ubiquitária) desestabiliza a RNF128 para prevenir a anergia das células T, enquanto a isoforma 2 (específica de tecidos linfoides) estabiliza a RNF128 e promove a anergia (PubMed:14661020). Referências relacionadas: PMID:14661020
• Além da sua atividade catalítica, a OTUB1 atua de forma não catalítica na reparação de danos no DNA ao ligar-se à ubiquitina livre e inibir a UBE2N/UBC13, limitando assim a ubiquitinação de histonas ligada por 'Lys-63' mediada pela RNF168 (PubMed:20725033, 22325355). Referências relacionadas: PMID:20725033 PMID:22325355
• A OTUB1 desubiquitina o recetor alfa de estrogénio (ESR1) e pode remover conjugados de NEDD8, embora com menor eficiência do que a ubiquitina ligada por 'Lys-48' (PubMed:19383985, 18954305, 23827681). Referências relacionadas: PMID:19383985 PMID:18954305 PMID:23827681
• A fosforilação em Tyr-26 regula a atividade do mTORC1 ao mediar a desubiquitinação não catalítica do RPTOR, enquanto a desubiquitinação do DEPTOR dependente de aminoácidos pode inibir o mTORC1 e o mTORC2 (PubMed:29382726, 35927303). Referências relacionadas: PMID:29382726 PMID:35927303
• A localização subcelular é predominantemente citoplasmática.
• A isoforma 1 é expressa ubiquamente, enquanto a isoforma 2 está restrita aos tecidos linfoides (amígdalas, gânglios linfáticos, baço) e às células mononucleares do sangue periférico.
• A OTUB1 pertence à família de proteases tiol do domínio OTU e é classificada como uma hidrolase; participa nas vias de imunidade, reparação do DNA e conjugação da ubiquitina.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunogénio abrange a região N-terminal (aa 1-220) da OTUB1 humana, que inclui o domínio OTU; a reatividade cruzada observada com camundongo e rato sugere conservação desta região.
• Para western blot, é esperada uma banda próxima de 31 kDa; utilize controlos positivos adequados (por exemplo, lisados de HeLa ou Jurkat) e considere o knockdown por siRNA para confirmar a especificidade.
• Na imunofluorescência/ICC, efetue a fixação e permeabilização padrão; são esperados padrões de marcação citoplasmáticos.
• Para aplicações de ELISA, otimize a concentração do antigénio de revestimento e as diluições do anticorpo; a combinação com um anticorpo de deteção pode apoiar o desenvolvimento de ensaios sandwich.
• Embora tenha sido demonstrado que o anticorpo reage com amostras humanas, de camundongo e de rato, verifique sempre o desempenho no seu sistema experimental específico.

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