Anticorpo Policlonado de Coelho Anti-P4HA2 para WB, IF/ICC, ELISA - O15460

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do P4HA2

• A prolil 4-hidroxilase subunidade alfa-2 (P4HA2) é uma enzima chave na biossíntese do colágeno, catalisando a hidroxilação de resíduos de prolina nas sequências -Xaa-Pro-Gly- para formar 4-hidroxiprolina, que é essencial para a estabilidade e função da tripla hélice do colágeno.
• P4HA2 é uma das várias isoformas de subunidade alfa que formam complexos heterotetrâmeros com P4HB (subunidade beta) para constituir a prolil 4-hidroxilase ativa; o splicing alternativo produz múltiplas variantes de transcrito.
• A enzima se localiza predominantemente no lúmen do retículo endoplasmático, onde ocorre a modificação pós-traducional dos polipeptídeos de colágeno nascentes.
• Sua atividade catalítica depende dos cofatores ferro (Fe²⁺), 2-oxoglutarato, oxigênio molecular e ascorbato (vitamina C), classificando-a como membro da família das dioxigenases dependentes de 2-oxoglutarato.
• O perfil de expressão tecidual revela os níveis mais altos no coração, placenta, pulmão e pâncreas, o que é consistente com tecidos ricos em colágeno tipos I e IV.
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação N-ligada; a proteína também é anotada com domínios de ligação a ferro e metais, e seus defeitos estão associados a variantes de doenças.
• A proteína contém motivos de repetição tetratricopeptídica (TPR), que estão implicados nas interações proteína-proteína e na montagem do complexo prolil 4-hidroxilase.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos resíduos 239-333 do P4HA2 humano, uma região que apresenta alta conservação de sequência entre mamíferos; recomendamos verificar o alinhamento para o seu organismo modelo.
• Para Western blot (WB), uma banda esperada de cerca de 61 kDa deve ser observada; use condições redutoras, a menos que tenha otimização diferente.
• Em imunofluorescência/ICC, espera-se coloração localizada no retículo endoplasmático; recomendamos a co-coloração com um marcador de retículo endoplasmático.
• Para ELISA, padronize a concentração do antígeno de revestimento e a diluição do anticorpo no seu sistema de ensaio; a reatividade cruzada indica utilidade para amostras humanas, de camundongo e de rato.
• Como a hidroxilação do colágeno é um processo dinâmico, considere usar a detecção de P4HA2 em estudos de fibrose, remodelação do estroma canceroso ou distúrbios do tecido conjuntivo.

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