Anticorpo monoclonal anti-p70 S6 Kinase 1 para WB, IF/ICC, ELISA - P23443

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da p70 S6 Kinase 1

• A proteína quinase beta-1 do ribossomo S6 (RPS6KB1), também conhecida como p70 S6 kinase 1 (p70S6K1), S6K e STK14A, é uma proteína quinase de serina/treonina codificada pelo gene RPS6KB1 em humanos (GeneID: 6198).
• Atua como um efetor a jusante crítico da sinalização de mTOR, promovendo a proliferação celular, o crescimento e a progressão do ciclo celular em resposta a fatores de crescimento e nutrientes. Referências relacionadas: PMID:11500364 PMID:12801526 PMID:14673156
• Regula a síntese proteica por meio da fosforilação de EIF4B, RPS6 e EEF2K; também aumenta a iniciação da tradução ao direcionar PDCD4 para degradação e fosforilar POLDIP3/SKAR. Referências relacionadas: PMID:11500364 PMID:12801526 PMID:14673156 PMID:17053147 PMID:15341740
• Localiza-se principalmente no citoplasma e no núcleo, mas também é detectada na membrana externa das mitocôndrias, nas sinapses e nos sinaptossomos.
• É amplamente expressa nos tecidos.
• É fosforilada em múltiplos sítios e acetilada; participa da inibição por feedback do mTORC2 ao fosforilar SIN1, mTOR, RICTOR e DEPTOR; também suprime a proteína pró-apoptótica BAD e regula a sinalização da insulina por meio da fosforilação de IRS1. Referências relacionadas: PMID:15899889 PMID:19720745 PMID:19935711 PMID:22017876 PMID:17936702 PMID:18952604

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético correspondente aos aminoácidos 1-100 da p70 S6 Kinase 1 humana (NP_003152.1). Essa abordagem direcionada à região N-terminal pode ser útil para detectar tanto as isoformas de comprimento total quanto possíveis isoformas truncadas na região N-terminal.
• Para Western blot (WB), espera-se uma banda de aproximadamente 59 kDa em amostras humanas, de camundongo e de rato; linhagens celulares ou tecidos com sinalização de mTOR ativa, como células HeLa ou HEK293 estimuladas ou tecido hepático, podem servir como controles positivos.
• Na imunofluorescência (IF/ICC), pode ser observada uma marcação citoplasmática e nuclear pontilhada, com possível localização mitocondrial ou sináptica sob condições específicas; a fixação e a permeabilização devem ser otimizadas.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser considerado um reagente de captura ou detecção em ensaios do tipo sanduíche, mas recomenda-se validar o pareamento e determinar o título na matriz de amostra relevante.
• A especificidade do anticorpo deve ser confirmada utilizando modelos de knockout/knockdown ou tratamento com fosfatase para verificar a dependência da fosforilação, uma vez que o alvo é intensamente fosforilado.

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