Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-PARP1 para WB, IF, IHC, ELISA - P09874

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PARP1

• A PARP1 funciona como uma poli-ADP-ribosiltransferase, catalisando a transferência de unidades de ADP-ribose do NAD+ para proteínas alvo. Esta atividade é central para o reparo de danos no DNA e manutenção da integridade genómica. Referências relacionadas: PMID:17177976, PMID:18055453, PMID:18172500

• Após o reconhecimento de quebras na cadeia de DNA, a PARP1 recruta a HPF1 para iniciar a ADP-ribosilação de serina em histonas (por exemplo, H2B em Ser6, H3 em Ser10), levando à descompactação da cromatina e montagem de complexos de reparo. Referências relacionadas: PMID:18172500, PMID:19344625, PMID:17177976

• A PARP1 participa tanto nas vias de reparo por excisão de base (BER) quanto nas de reparo de quebra de cadeia dupla (DSBR). Ela coopera com a TIMELESS para promover a recombinação homóloga através da poli-ADP-ribosilação de fatores de reparo. Referências relacionadas: PMID:26344098, PMID:30356214

• Além do reparo de DNA, a PARP1 regula a transcrição ligando-se a nucleossomas e alterando a arquitetura da cromatina de maneira semelhante à histona H1, reprimindo assim a atividade da RNA polimerase II. Referências relacionadas: PMID:15607977, PMID:22464733

• A PARP1 é um mediador crítico da morte celular programada. O seu produto de clivagem pela caspase-3/7 transloca para o citoplasma, carregando cadeias de poli-ADP-ribose que desencadeiam apoptose dependente de AIFM1. Referências relacionadas: PMID:33168626

• Subcelularmente, a PARP1 reside predominantemente no núcleo, nucléolo e nos cromossomas. Após fosforilação pela PRKDC, pode deslocar-se para o citoplasma, onde modula vias imunes inatas, como a via cGAS-STING. Referências relacionadas: PMID:35460603

• A PARP1 catalisa a sua própria auto-poli-ADP-ribosilação, uma modificação regulatória importante que controla a sua atividade, interações proteicas e recrutamento para lesões de DNA. Referências relacionadas: PMID:17396150, PMID:19764761, PMID:24906880

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio encontra-se dentro dos aminoácidos 200–300 da PARP1 humana, uma região que contém o segundo dedo de zinco e parte do domínio BRCT. O anticorpo monoclonal de coelho resultante deve reconhecer um epítopo conservado entre as espécies reativas listadas (humano, rato, rato).
• Para Western blot (WB), deve ser detectada uma banda predominante em aproximadamente 113 kDa. Considere usar extratos nucleares como fonte da amostra e valide a especificidade através de knockdown de PARP1 mediado por siRNA.
• Em imunofluorescência (IF/ICC) e imuno-histoquímica (IHC-P), espere padrões de coloração nuclear ou cromossómica. Como secções embebidas em parafina podem exigir recuperação antigénica, otimize protocolos de recuperação de epítopo induzida por calor à base de citrato ou EDTA para o seu tecido.
• O anticorpo é relatado para aplicações de ELISA. Para ELISA sanduíche, recomenda-se o emparelhamento com um segundo clone direcionado a um epítopo distinto; uma triagem interna de pares pode identificar combinações ótimas de captura/detecção.
• Como a PARP1 sofre extensas modificações pós-traducionais e clivagem, considere o contexto biológico (por exemplo, indução de dano no DNA, apoptose) ao interpretar os resultados. As formas de comprimento total e clivadas podem coexistir dependendo das condições de tratamento.

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