Anticorpo monoclonal de coelho anti-PBEF/Visfatina/NAMPT para WB, IHC-P, ELISA - P43490

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da PBEF/Visfatina/NAMPT

• A PBEF/Visfatina/NAMPT, também conhecida como nicotinamida fosforribosiltransferase, é uma proteína de 56 kDa que funciona como a enzima limitante da velocidade na biossíntese de NAD em mamíferos, catalisando a condensação da nicotinamida com o 5-fosforribosil-1-pirofosfato para produzir mononucleótido de nicotinamida.
• Além do seu papel enzimático, a forma secretada da NAMPT atua como uma citocina (PBEF) com propriedades imunomoduladoras e como uma adipocina (visfatina) com potenciais efeitos antidiabéticos; esta forma não apresenta atividade enzimática devido à baixa disponibilidade de ATP no espaço extracelular.
• A NAMPT contribui para a regulação do relógio circadiano ao promover a produção oscilatória de NAD, que modula a atividade do heterodímero CLOCK-BMAL1 através da desacetilação mediada por SIRT1, influenciando a expressão génica rítmica.
• A proteína localiza-se no núcleo e no citoplasma, sendo também secretada; a sua distribuição subcelular é consistente com os seus papéis bifuncionais no metabolismo e na sinalização intercelular.
• A NAMPT é altamente expressa na medula óssea, no fígado e no músculo, estando também presente no coração, na placenta, nos pulmões e nos rins, o que reflete as suas amplas funções metabólicas e imunológicas.
• As modificações pós-traducionais incluem acetilação e fosforilação, que podem regular a sua atividade enzimática, estabilidade ou secreção em diferentes condições fisiológicas.
• Estruturalmente, a NAMPT pertence à família das glicosiltransferases, e a sua estrutura tridimensional foi determinada, proporcionando informações sobre a ligação ao substrato e o mecanismo catalítico.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunogénio abrange os aminoácidos 300–400 da NAMPT humana; considere a acessibilidade do epítopo em condições nativas versus desnaturadas ao planear as experiências.
• Para Western blot, é esperada uma banda próxima de 56 kDa; valide utilizando lisados adequados de tecidos humanos, de rato ou de camundongo e utilize controlos positivos e negativos para confirmar a especificidade.
• Para IHC-P, podem ser necessários métodos adequados de recuperação antigénica; considere testar em tecidos com expressão elevada conhecida, como fígado e medula óssea, e inclua controlos de isotipo.
• Em aplicações de ELISA, a combinação deste anticorpo com um reagente de deteção dirigido a um epítopo não sobreposto poderá permitir o desenvolvimento de um ensaio sanduíche; valide-o em matrizes de amostras relevantes.

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