Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-PCNA para WB, IHC-P, ELISA - P12004

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PCNA

• A PCNA é uma braçadeira deslizante de DNA que confere processividade às DNA polimerases durante a replicação do DNA. Referências relacionadas: PMID:35585232
• Atua como uma proteína auxiliar para a DNA polimerase delta e épsilon, aumentando sua processividade durante o alongamento da fita principal. Referências relacionadas: PMID:35585232
• A PCNA desempenha um papel crucial na resposta a danos no DNA (DDR) coordenando a replicação do DNA com as vias de reparo, servindo como uma plataforma de carregamento para proteínas DDR. Referências relacionadas: PMID:24939902
• Modificações pós-traducionais da PCNA, incluindo monoubiquitinação e poliubiquitinação ligada à Lis-63, ditam a escolha das vias de tolerância a danos no DNA: a monoubiquitinação recruta polimerases de síntese translésion, enquanto a poliubiquitinação desencadeia o reparo mediado por recombinação livre de erros. Referências relacionadas: PMID:24695737
• A PCNA estimula as atividades exonucleásicas 3'-5' e 3'-fosfodiesterase da APEX2, mas não sua atividade endonucleásica AP, e requer carregamento no DNA para esta função.
• Localizada predominantemente no núcleo, a PCNA é um componente-chave do garfo de replicação.
• Mutações na PCNA estão associadas a distúrbios neurodegenerativos, surdez e nanismo.
• A proteína sofre extensas modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, metilação, fosforilação e ubiquitinação, que regulam suas diversas funções.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde a uma região conservada (aa 162-261) compartilhada entre humano, camundongo e rato, consistente com a reatividade cruzada relatada. Valide a reatividade em sua matriz de amostra específica se estiver usando outras espécies.
• Para Western blot, espere uma banda em ~29 kDa; o enriquecimento nuclear pode melhorar a intensidade do sinal. Otimize a diluição do anticorpo primário usando uma série de titulação (por exemplo, começando em 1:500–1:2000).
• O IHC-P pode se beneficiar de recuperação antigênica; inclua controles positivos (tecidos proliferativos) e negativos (controle de isotipo) para confirmar a especificidade.
• O ELISA pode ser empregado para detectar ou quantificar PCNA em lisados celulares; certifique-se de que os tampões de revestimento e as condições de bloqueio apropriadas estejam otimizados para o seu formato de ensaio.
• Considere usar amostras frescas ou congeladas e minimizar o armazenamento prolongado ou ciclos repetidos de congelamento e descongelamento para preservar a integridade do epítopo.

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