Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-PCSK9 para WB, IF/ICC, ELISA - Q80W65

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PCSK9

• A proproteína convertase subtilisina/kexina tipo 9 (PCSK9), também conhecida como NARC-1 ou PC9, é uma serina protease secretada que pertence à família das proproteínas convertases. Ela é sintetizada como zimogênio e sofre clivagem autocatalítica no retículo endoplasmático.
• PCSK9 é um regulador crucial da homeostase do colesterol plasmático ao se ligar aos membros da família do receptor de lipoproteína de baixa densidade (LDLR, VLDLR, LRP1, LRP8) e promover sua degradação intracelular, reduzindo assim a captação do colesterol LDL.
• Ela aumenta a degradação do LDLR hepático por meio de uma via dependente de clatrina, provavelmente impedindo a reciclagem do LDLR dos endossomos para a superfície celular ou direcionando-o para os lisossomos, e também pode induzir a ubiquitinação do LDLR.
• Além do LDLR, a PCSK9 inibe a degradação intracelular da apolipoproteína B (APOB) por meio de uma via de autofagossomo/lisossomo independente do LDLR e participa da eliminação de intermediários não acetilados de BACE1 na via secretora inicial.
• A PCSK9 modula a absorção de Na+ mediada pelo canal epitelial de sódio (ENaC) ao diminuir sua expressão superficial por meio do aumento da degradação proteassômica, e regula a apoptose neuronal por meio de sinalização antiapoptótica dependente de LRP8/APOER2.
• Subcelularmente, a PCSK9 se localiza no citoplasma, é secretada e se associa a endossomos, lisossomos, superfície celular, retículo endoplasmático e aparelho de Golgi, refletindo sua diversidade de tráfego e funcional.
• A expressão tecidual é proeminente em hepatócitos, células mesenquimais renais, epitélio do íleo intestinal e cólon, e neurônios do telencéfalo do cérebro embrionário.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno cobre os aminoácidos 35–694 da PCSK9 de camundongo, abrangendo o domínio catalítico e a região C-terminal; o anticorpo pode reconhecer tanto a forma pró-proteica completa (~74 kDa) quanto a forma madura clivada. Recomenda-se validar as bandas detectadas com controles apropriados.
• Para Western blotting, use SDS-PAGE redutor e espere uma banda principal próxima a 74 kDa em lisados de fígado de camundongo ou hepatócitos; o anticorpo tem reatividade cruzada com humano e rato, mas confirme a reatividade na sua espécie alvo.
• Em experimentos de IF/ICC, a PCSK9 apresenta distribuição citoplasmática granular e perinuclear, consistente com os compartimentos de RE, Golgi e endossomos. A permeabilização é necessária; otimize a fixação e a diluição do anticorpo para o seu tipo celular.
• Para aplicações de ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção para medir PCSK9 em sobrenadantes de cultura celular ou fluidos biológicos. Valide as condições do ensaio com padrões recombinantes de PCSK9.

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