Anticorpo Policlonal Anti-PENK para WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P01210

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Proencefalina-A

• A Proencefalina-A (PENK) é uma proteína precursora que é processada proteoliticamente para gerar vários peptídeos opioides ativos, incluindo Met-encefalina e Leu-encefalina, que são críticos para modular a percepção da dor e as respostas ao estresse.
• As encefalinas codificadas atuam como ligantes endógenos para receptores opioides, mimetizando os efeitos de drogas opiáceas e desempenhando papéis fundamentais na analgesia, recompensa e regulação do estresse.
• Um de seus produtos de clivagem, a Met-encefalina-Arg-Phe, atua como um agonista forte do receptor opioide do tipo Mu (OPRM1) no núcleo accumbens, levando à depressão sináptica de longo prazo da liberação de glutamato.
• Os peptídeos derivados da PENK também exercem efeitos não opioides ao se ligarem ao receptor MRGPRX1, induzindo sensações de coceira e nociceptivas independentes de histamina em neurônios sensoriais. Referências relacionadas: PMID:11850634 PMID:28223516 PMID:21593341
• Subcelularmente, a proencefalina-A está localizada no lúmen de vesículas secretoras, como grânulos cromafins, e é secretada após estímulo, consistente com seu papel como neuropeptídeo.
• A proteína contém características estruturais incluindo um peptídeo sinal, múltiplos sítios de clivagem em resíduos básicos pareados e uma ligação dissulfeto, que são essenciais para seu processamento e secreção.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange os aminoácidos 25–267 da proencefalina-A humana, englobando a maior parte da proteína precursora. Este anticorpo policlonal pode reconhecer tanto o precursor de comprimento total quanto seus fragmentos processados.
• Para Western blot (WB), o peso molecular previsto do precursor de comprimento total é 31 kDa; no entanto, devido ao processamento pós-traducional, múltiplas bandas correspondentes a peptídeos contendo encefalina podem ser observadas. A otimização da porcentagem do gel e dos controles de carga é recomendada.
• Em imuno-histoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF-P), métodos de fixação apropriados (ex.: PFA 4%) e de recuperação de antígeno devem ser validados para o tecido alvo, pois antígenos de neuropeptídeos podem ser sensíveis à superfixação.
• A reatividade cruzada com camundongo e rato permite estudos translacionais nessas espécies, mas a validação da especificidade do anticorpo para a espécie via controles de nocaute ou peptídeo bloqueador é aconselhada.
• Para ELISA, o emparelhamento com um anticorpo de detecção correspondente pode ser necessário. Experimentos de titulação devem determinar as concentrações ideais de anticorpo de revestimento e detecção.

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