Anticorpo Policlonal Anti-PHD2/EGLN1 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q9GZT9

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de PHD2/EGLN1

• PHD2/EGLN1 (homólogo 1 de Egl nine), também designado HIF-prolil hidroxilase 2 (HIF-PH2) ou PHD2, é um sensor de oxigênio celular codificado pelo gene EGLN1. Pertence à família EGLN de prolil hidroxilases e é a principal isoenzima reguladora da estabilidade do fator induzível por hipóxia (HIF) em condições normóxicas.
• Sob níveis normais de oxigênio, o PHD2 catalisa a hidroxilação de resíduos de prolina específicos dentro dos domínios de degradação dependente de oxigênio (ODD) do HIF-1α e HIF-2α. Esta modificação pós-traducional promove o reconhecimento pelo complexo ligase de ubiquitina E3 von Hippel-Lindau (VHL), levando à degradação proteassomal das subunidades HIFα. Consequentemente, os programas transcricionais mediados por HIF são suprimidos.
• Durante a hipóxia, a atividade do PHD2 diminui, permitindo que as proteínas HIFα se acumulem, dimerizem com o HIF-1β e se translocalizem para o núcleo para impulsionar a expressão de genes envolvidos na angiogênese, eritropoiese, adaptação metabólica e sobrevivência celular. Este mecanismo está na base da adaptação celular à redução da disponibilidade de oxigênio.
• O PHD2 localiza-se predominantemente no citoplasma, mas também pode ser detectado no núcleo, consistente com seu papel na detecção de oxigênio e na modificação de proteínas HIFα em ambos os compartimentos.
• Amplamente expresso em tecidos, com os níveis mais altos de mRNA observados em músculo esquelético, coração, cérebro, rim e glândula adrenal (PubMed:11056053; PubMed:12351678). A proteína é detectada em miócitos cardíacos, células endoteliais da aorta e músculo liso da artéria coronária. Tecidos fetais também mostram expressão significativa, particularmente no cérebro, coração, baço e músculo esquelético (PubMed:12788921). Referências relacionadas: PMID:11056053 PMID:12351678 PMID:12788921
• O PHD2 sofre várias modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, fosforilação e S-nitrosilação, que podem modular sua atividade ou estabilidade. Requer ferro, 2-oxoglutarato e ascorbato (vitamina C) como cofatores para sua atividade dioxigenase e contém um domínio dedo de zinco.
• Mutações no EGLN1 estão associadas à eritrocitose congênita tipo 3 (ECYT3), destacando seu papel crítico na regulação da eritropoietina e na produção de glóbulos vermelhos.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno usado para produzir este anticorpo policlonal é uma proteína recombinante que abrange quase todo o comprimento (aa 1-426) do PHD2/EGLN1 humano, correspondendo à sequência canônica. Este projeto pode favorecer o reconhecimento da proteína endógena em múltiplas aplicações.
• Para aplicações de Western blotting (WB), uma banda específica correspondente ao peso molecular previsto de aproximadamente 46 kDa deve ser observada. A otimização do preparo da amostra, quantidade de carga e condições de detecção é recomendada. Controles positivos derivados de tecidos com alta expressão de PHD2, como músculo esquelético ou coração, podem ser benéficos.
• Em imuno-histoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), considere testar uma variedade de métodos de recuperação antigênica e diluições de anticorpo. Dada a dupla localização citoplasmática/nuclear do PHD2, os padrões de coloração devem ser avaliados no contexto do estado de oxigênio celular. Controles apropriados de tipo de tecido ou linhagem celular (por exemplo, normóxico vs. hipóxico) podem ajudar a confirmar a especificidade.
• Para ensaios baseados em ELISA, o anticorpo pode ser adequado como reagente de captura ou detecção após validação na matriz de amostra relevante. Os usuários devem realizar testes de reatividade cruzada e interferência de acordo com os requisitos específicos de seu protocolo.
• Embora este anticorpo seja relatado como tendo reatividade cruzada com PHD2/EGLN1 de camundongo e rato, o alinhamento de sequências e experimentos piloto são aconselhados para confirmar reatividade equivalente nessas espécies para a aplicação pretendida.

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