Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-PHD3 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q9H6Z9

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do PHD3

• O PHD3, também conhecido como homólogo Egl nove 3, hidroxilase prolinil 3 do HIF (HIF-PH3) e proteína contendo domínio de hidroxilase prolinil 3 (PHD3), é codificado pelo gene EGLN3 e é uma hidroxilase prolinil que media a hidroxilação de resíduos de prolina em proteínas-alvo como PKM, TELO2, ATF4, GPX4 e HIF1A (PubMed:19584355, PubMed:20978507, PubMed:21483450). Referências relacionadas: PMID:19584355, PMID:20978507, PMID:21483450
• Como sensor de oxigénio celular, em condições normóxicas, o PHD3 catalisa a hidroxilação de resíduos de prolina específicos no fator indutível por hipóxia alfa (HIF1A e HIF2A), visando a sua degradação proteossómica através do complexo von Hippel-Lindau, atenuando assim a resposta hipóxica (PubMed:11595184, PubMed:12181324). Referências relacionadas: PMID:11595184, PMID:12181324
• O PHD3 atua como um inibidor da ferroptose ao hidroxilar a GPX4, impedindo a sua degradação via autofagia mediada por chaperonas; este processo é promovido pelo PSAT1 fornecendo o substrato 2-oxoglutarato (PubMed:40281343). Referências relacionadas: PMID:40281343
• Também hidroxila o PKM em hipóxia, limitando a glicólise (PubMed:21483450, PubMed:21620138). Referências relacionadas: PMID:21483450, PMID:21620138
• O PHD3 é um regulador da apoptose: em cardiomiócitos, inibe o efeito antiapoptótico do BCL2 ao perturbar o complexo BAX-BCL2 (PubMed:20849813); em neurónios, tem um efeito pró-apoptótico induzido por NGF ao regular a atividade da CASP3 (PubMed:16098468). Referências relacionadas: PMID:20849813, PMID:16098468
• A proteína é essencial para a regulação hipóxica da inflamação neutrófila (PubMed:21317538) e desempenha um papel crucial na resposta a danos no DNA ao hidroxilar o TELO2, promovendo a sua interação com o ATR para a ativação da via ATR/CHK1/p53 (PubMed:22797300). Referências relacionadas: PMID:21317538, PMID:22797300
• O PHD3 localiza-se tanto no núcleo como no citoplasma e é amplamente expresso em baixos níveis, com maior expressão no coração adulto, pulmão, placenta e pâncreas (células acinares e das ilhotas), e no baço fetal, coração e músculo esquelético.
• Palavras-chave associadas ao PHD3 incluem apoptose, citoplasma, dioxigenase, dano no DNA, ferro, ligação a metais, núcleo, oxidorredutase, identificação por proteómica, proteoma de referência, conjugação Ubl e vitamina C.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio é um peptídeo sintético correspondente à região N-terminal (aa 1-100) do PHD3 humano, que é conservado entre humanos, camundongos e ratos (UniProt Q9H6Z9). O anticorpo policlonal resultante deve reconhecer tanto o PHD3 nativo como o desnaturado, sendo adequado para múltiplas aplicações.
• Para Western blotting (WB), espera-se uma banda em torno de 27 kDa. A diluição ideal do anticorpo deve ser determinada experimentalmente, uma vez que a variabilidade entre lotes é inerente aos anticorpos policlonais.
• Em imuno-histoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), considere métodos de recuperação de antigénio apropriados para secções incluídas em parafina e fixadas em formol. Valide a especificidade da coloração em tecidos com expressão conhecida (por exemplo, coração adulto, pulmão, placenta).
• Para ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou deteção, dependendo do formato do ensaio. Teste diferentes concentrações de revestimento e condições de bloqueio para a melhor relação sinal-ruído.
• A reatividade cruzada com camundongo e rato é suportada pelo alinhamento de sequências; no entanto, recomenda-se a validação no sistema de amostras relevante antes do uso em grande escala.
• Devido à natureza policlonal, o desempenho específico do lote pode variar. Inclua controlos positivos e negativos apropriados (por exemplo, lisados de células com knockout de PHD3) para confirmar a especificidade.

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