Anticorpo monoclonal de coelho Anti-Phospho-Akt-S473 para WB, IHC-P, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da AKT1

• AKT1 (serina/treonina-proteína quinase RAC-alfa) é membro da família das quinases AKT e regula o metabolismo, proliferação, sobrevivência celular, crescimento e angiogênese ao fosforilar mais de 100 substratos downstream. Referências relacionadas: PMID:11882383 PMID:15526160 PMID:15861136 PMID:21432781
• Ela medeia a captação de glicose induzida pela insulina via translocação SLC2A4/GLUT4 e estimula a síntese de glicogênio ao inibir GSK3 por meio de fosforilação.
• AKT1 promove a sobrevivência celular ao fosforilar e inibir proteínas pró-apoptóticas, incluindo MAP3K5/ASK1 e BAD. Referências relacionadas: PMID:11154276 PMID:10926925
• Ela ativa a via de sinalização mTORC1 ao fosforilar TSC2, levando ao aumento da síntese proteica e crescimento celular. Referências relacionadas: PMID:12150915 PMID:12172553
• AKT1 se localiza no citoplasma, núcleo, membrana celular e espaço intermembranar mitocondrial, possibilitando papéis de sinalização diversos.
• Sua expressão está elevada em cânceres de próstata e mama, e a forma fosforilada em Tyr-176 se correlaciona com a progressão tumoral do estágio normal para o metastático.
• As modificações pós-traducionais incluem fosforilação em Thr-308 e Ser-473 para ativação completa, acetilação, ubiquitinação e formação de ligação dissulfeto, conforme observado nas palavras-chave do UniProt.
• O anticorpo tem como alvo a Ser-473 fosforilada, um sítio de ativação crítico conservado entre AKT1 (P31749), AKT2 (P31751) e AKT3 (Q9Y243).

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético ao redor da Ser-473 da AKT1 humana; esse design garante alta especificidade para o epítopo fosforilado.
• Para Western blot, adicione inibidores de fosfatase ao tampão de lise e considere usar um bloqueio com BSA em baixa porcentagem para preservar os sinais de fosforilação.
• Para IHC-P, otimize a recuperação de antígeno (ex: tampão de citrato pH 6,0) e valide a coloração em amostras com ativação conhecida da via AKT, como tumores deficientes em PTEN.
• Para ELISA, o anticorpo pode atuar como reagente de captura ou detecção; realize experimentos de titulação cruzada para confirmar a compatibilidade com o formato do seu ensaio e condições de tampão.
• Sempre inclua controles positivos (ex: lisados celulares tratados com insulina ou fator de crescimento) e negativos (não tratados ou tratados com fosfatase) apropriados para verificar a especificidade para a forma fosforilada.

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