Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-Akt-T308 para WB, ELISA - P31749 / P31751 / Q9Y243

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de AKT (AKT1/AKT2/AKT3)

• AKT1 é uma das três serina/treonina-proteínas quinases intimamente relacionadas (AKT1, AKT2, AKT3) que regulam processos críticos como metabolismo, proliferação, sobrevivência celular, crescimento e angiogênese. Referências relacionadas: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136

• Como nó central na sinalização PI3K, AKT fosforila mais de 100 substratos a jusante em resíduos de serina/treonina para mediar os efeitos da insulina, fatores de crescimento e outros estímulos. Referências relacionadas: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:21432781

• Na homeostase da glicose, AKT promove a captação de glicose estimulada pela insulina via translocação de SLC2A4/GLUT4 e a síntese de glicogênio ao inibir GSK3A/B; também fosforila TBC1D4 para desencadear a ligação a 14-3-3, essencial para o transporte de glicose. Referências relacionadas: PMID:11994271

• AKT impulsiona a sobrevivência celular ao fosforilar e inibir substratos pró-apoptóticos como MAP3K5, BAD e os fatores de transcrição FOXO, o que leva ao sequestro citoplasmático das proteínas FOXO e à regulação positiva de genes anti-apoptóticos como BCL2 e MCL1 via CREB1. Referências relacionadas: PMID:11154276, PMID:10358075, PMID:9829964, PMID:10926925

• AKT ativa a sinalização mTORC1 ao fosforilar TSC2 e outros reguladores (CASTOR1, DEPDC5), controlando assim a síntese de proteínas e o crescimento celular. Referências relacionadas: PMID:12150915, PMID:12172553, PMID:31548394, PMID:33594058

• Subcelularmente, AKT é encontrada no citoplasma, núcleo, membrana celular e espaço intermembranar mitocondrial, refletindo suas diversas funções.

• Em humanos, AKT1 é expressa de forma ubíqua, com formas fosforiladas elevadas observadas em câncer de próstata e mama, sugerindo papéis na progressão tumoral.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético ao redor de Thr308 da Akt humana; a fosforilação nesse resíduo é crítica para a ativação da Akt. Portanto, o anticorpo é específico para a forma fosforilada e não deve reconhecer a Akt não fosforilada.
• Como Thr308 é conservado entre as isoformas AKT1, AKT2 e AKT3, espera-se que o anticorpo apresente reatividade cruzada com as formas fosforiladas correspondentes em camundongo e rato, conforme indicado nos dados de reatividade cruzada.
• Para análise por Western blot, utilize inibidores de fosfatase apropriados durante a preparação da amostra para preservar a fosforilação. Os pesos moleculares previstos das isoformas são de ~48-55 kDa; confirme a especificidade da banda com controles positivos e negativos (por exemplo, células estimuladas com insulina vs. células não tratadas).
• A aplicação em ELISA pode ser adequada para capturar ou detectar fosfo-Akt em lisados celulares; otimize as condições de revestimento e detecção para a sua matriz específica.
• Dado que a fosforilação de T308 é dinâmica, inclua controles experimentais adequados para avaliar a ativação da via de sinalização (por exemplo, tratamento com inibidor de PI3K).

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