Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-AKT1 (T450) para WB, ELISA - P31749

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da AKT1

• A AKT1 é uma serina/treonina-proteína quinase, uma das três isoformas de AKT intimamente relacionadas (AKT1, AKT2, AKT3), também conhecida como Proteína Quinase B (PKB), que regula diversos processos celulares, incluindo metabolismo, proliferação, sobrevivência, crescimento e angiogénese. Referências relacionadas: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136
• A AKT1 media a sinalização a jusante da fosfoinositídeo 3-quinase (PI3K) em resposta a fatores de crescimento como insulina, IGF1, EGF e PDGF, e fosforila uma vasta gama de substratos. Referências relacionadas: PMID:12176338, PMID:12964941
• A fosforilação da TSC2 em Ser-939 e Thr-1462 pela AKT1 leva à ativação da via mTORC1, promovendo a síntese proteica e o crescimento celular. Referências relacionadas: PMID:12150915, PMID:12172553
• A AKT1 regula a sobrevivência celular ao fosforilar e inibir fatores pró-apoptóticos como MAP3K5 (ASK1) e BAD, e ao ativar fatores de transcrição de sobrevivência como CREB1. Referências relacionadas: PMID:11154276, PMID:10926925, PMID:9829964
• A AKT1 regula o transporte de glicose estimulado pela insulina ao fosforilar a TBC1D4, o que desencadeia a ligação a proteínas 14-3-3 e facilita a translocação de GLUT4 para a superfície celular. Referências relacionadas: PMID:11994271
• A AKT1 circula entre o citoplasma, núcleo, membrana celular e espaço intermembranar mitocondrial, com a fosforilação na Thr450 (e outros locais) a influenciar a sua ativação e localização.
• A quinase é expressa ubiquamente em tecidos humanos, com níveis proteicos e fosforilação aumentados observados em cancros da próstata e da mama, destacando o seu papel como proto-oncogene.
• As principais modificações pós-traducionais incluem fosforilação, acetilação e ubiquitinação, que modulam a sua atividade, estabilidade e interações.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio é um péptido fosforilado sintético correspondente aos resíduos em torno da Thr450 da AKT1 humana. Garanta que as suas condições experimentais preservam a fosforilação da proteína; considere utilizar inibidores de fosfatase durante a preparação da amostra.
• Para Western blot (WB), o anticorpo foi concebido para reconhecer especificamente a AKT1 fosforilada na Thr450. Valide a especificidade do sinal utilizando lisados tratados com fosfatase ou um controlo de bloqueio com péptido não fosforilado, se necessário.
• O anticorpo é adequado para aplicações de ELISA. Considere otimizar as condições de revestimento e deteção utilizando proteína AKT1 fosforilada purificada ou péptido.
• A reatividade cruzada foi demonstrada com AKT1 humana e de rato. Verifique a reatividade com outras espécies, se necessário, uma vez que a T450 da AKT1 é altamente conservada, mas pode apresentar ligeiras variações.
• Dado o papel da AKT1 em múltiplas vias de sinalização, utilize estímulos apropriados (por exemplo, insulina, fatores de crescimento) para induzir a fosforilação na Thr450 no seu modelo experimental.

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