Anticorpo policlonal de coelho Anti-Fosfo-BRD4 (Ser1070) para WB, ELISA - O60885

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do BRD4

• BRD4 (proteína 4 contendo bromodomínio), também conhecido como HUNK1, é um leitor de cromatina que se liga a histonas acetiladas e transmite memória epigenética através das divisões celulares. Ele permanece associado à cromatina durante todo o ciclo celular, ajudando a manter a estrutura da cromatina e possibilitando a transcrição pós-mitótica (PubMed:20871596, PubMed:23086925, PubMed:23317504, PubMed:22334664, PubMed:23589332). Referências relacionadas: PMID:20871596 PMID:23086925 PMID:23317504 PMID:22334664 PMID:23589332

• Ele recruta o complexo P-TEFb para promotores e potenciadores, promovendo a fosforilação do domínio C-terminal (CTD) da RNA polimerase II na Serina 2 e facilitando o alongamento transcricional. O JMJD6 colabora com o BRD4 para deslocar reguladores negativos como HEXIM1 e o snRNA 7SK (PubMed:16109376, PubMed:16109377, PubMed:19596240). Referências relacionadas: PMID:16109376 PMID:16109377 PMID:19596240

• BRD4 reconhece o RELA acetilado, levando ao recrutamento do P-TEFb e à ativação da sinalização de NF-kappa-B (PubMed:19103749). Referências relacionadas: PMID:19103749

• Após a fosforilação pela CK2, o BRD4 é recrutado para os promotores alvo de p53/TP53 e regula a transcrição mediada por p53 (PubMed:23317504). Referências relacionadas: PMID:23317504

• Na resposta a danos no DNA, o BRD4 funciona como um isolador de cromatina ao recrutar o complexo condensina-2 para histonas acetiladas, limitando a propagação da fosforilação de H2AX e modulando a sinalização.

• BRD4 está predominantemente localizado no núcleo e nos cromossomos, o que é consistente com seu papel na regulação da cromatina. Ele é expresso de forma ubíqua e sofre várias modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação e acetilação.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Para manter a fosforilação do BRD4 na Serina 1070 durante a preparação da amostra, adicione inibidores de fosfatase aos tampões de lise e evite a incubação prolongada à temperatura ambiente.
• Para western blotting (WB), o peso molecular previsto do BRD4 é de 152 kDa; confirme a identidade da banda usando controles positivos e negativos apropriados (por exemplo, lisados tratados com fosfatase).
• Os experimentos de ELISA devem incluir controles de peptídeo fosforilado e não fosforilado para verificar a especificidade do anticorpo pelo fosfo-epítopo.
• Otimize empiricamente a diluição do anticorpo e as condições de incubação; as diluições iniciais típicas para WB variam de 1:500 a 1:2000.

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