Anticorpo Monoclonal Anti-Fosfo-Chk1 (S280) para WB, ELISA - O14757

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Serina/treonina-proteína quinase Chk1

• A Serina/treonina-proteína quinase Chk1 (CHEK1) é uma quinase crítica para a parada do ciclo celular mediada por checkpoint e o reparo do DNA. Uma isoforma de splicing alternativo (isoforma 2) atua como um repressor endógeno da isoforma 1, antagonizando sua função.
• Necessária para a resposta a danos no DNA: reconhece a sequência consenso do substrato [R-X-X-S/T] e fosforila CDC25A, CDC25B e CDC25C, criando sítios de ligação 14-3-3 que inibem essas fosfatases e/ou promovem a degradação de CDC25A, resultando em fosforilação tirosina inibitória dos complexos CDK-ciclina e parada do ciclo celular. Referências relacionadas: PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:9278511
• Fosforila RAD51 em Thr-309, promovendo sua liberação de BRCA2 e aumentando a associação com a cromatina, facilitando assim o reparo do DNA por recombinação homóloga. Referências relacionadas: PMID:15665856
• Fosforila múltiplos sítios C-terminais de TP53, aumentando sua acetilação e ativação para promover a parada do ciclo celular e suprimir a proliferação. Referências relacionadas: PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• Também fosforila outros substratos, incluindo FANCE (reparo de ligações cruzadas no DNA), TLK1 (montagem da cromatina), histona H3.1 em Thr-11 (silenciamento epigenético de genes), RB1 (promovendo a interação com E2F), SPRTN (recrutamento à cromatina) e PABIR1/FAM122A (regulação do checkpoint G2/M). Referências relacionadas: PMID:17296736 PMID:12660173 PMID:12955071 PMID:17380128 PMID:31316063 PMID:33108758
• A localização subcelular inclui o núcleo, cromossomos, citoplasma e centrossomos, o que é consistente com seus papéis na sinalização de checkpoint, reparo do DNA e regulação do ciclo celular.
• Expressa-se de forma ubíqua, com níveis mais elevados no timo, testículo, intestino delgado e cólon.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado ao redor de Ser280 da Chk1 humana. O anticorpo é projetado para reconhecer especificamente a forma fosforilada. Valide a especificidade comparando os sinais em amostras tratadas com fosfatase versus amostras não tratadas ou usando um peptídeo de bloqueio não fosforilado.
• Para Western blot, recomenda-se o uso de inibidores de fosfatase adequados durante a preparação da amostra para preservar o sinal de fosforilação. É esperada uma banda próxima a 54 kDa para Chk1.
• No ELISA, considere usar um peptídeo fosforilado ligado à placa e um controle de peptídeo não fosforilado para confirmar a fosfo-especificidade.
• A fosforilação de Chk1 em Ser280 é induzida por danos no DNA. A estimulação de células com agentes danificadores do DNA (ex.: UV, hidréia de hidroxi) pode melhorar a detecção nas linhagens celulares relevantes.

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