Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-Chk1 (S317) para WB, ELISA - O14757

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Chk1

• Quinase serina/treonina-proteína (gene CHEK1) que existe em duas isoformas: a quinase de comprimento total (isoforma 1) e uma isoforma repressora endógena que antagoniza a CHK1 para promover a transição de S para G2/M.
• Necessária para a parada do ciclo celular mediada por pontos de verificação e ativação do reparo do DNA em resposta a danos no DNA ou DNA não replicado. Referências relacionadas: PMID:11535615 PMID:12399544 PMID:12446774
• Fosforila fosfatases da família CDC25 (CDC25A, CDC25B, CDC25C) para criar sítios de ligação 14-3-3 e inibir sua atividade, impedindo assim a ativação de CDK-ciclina e bloqueando a progressão do ciclo celular. Referências relacionadas: PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:9278511
• Marca a CDC25A para degradação proteossomal por fosforilar múltiplos resíduos de serina (Ser-76, Ser-124, Ser-178, Ser-279, Ser-293), com a Ser-76 servindo como preparação para a poliubiquitinação mediada por NEK11. Referências relacionadas: PMID:12676583 PMID:12676925 PMID:12759351 PMID:19734889 PMID:20090422 PMID:9278511
• Fosforila RAD51 na Thr-309, promovendo sua liberação da BRCA2 e aumentando a associação à cromatina para facilitar o reparo por recombinação homóloga. Referências relacionadas: PMID:15665856
• Fosforila TP53 em múltiplos sítios C-terminal, promovendo acetilação, ativação transcricional e parada do ciclo celular. Referências relacionadas: PMID:10673501 PMID:15659650 PMID:16511572
• Adicionalmente, fosforila FANCE (reparo de ligações cruzadas de DNA), TLK1 (montagem da cromatina) e outros substratos para coordenar a manutenção do genoma. Referências relacionadas: PMID:17296736 PMID:12660173 PMID:12955071
• Localiza-se no núcleo, cromossomos, citoplasma e centrossomo; expressa de forma ubíqua com níveis mais altos no timo, testículo, intestino delgado e cólon.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para confirmar a especificidade para fosfosítio, trate as amostras com fosfatase lambda ou inclua um controle de bloqueio com peptídeo não fosforilado.
• Para Western blot, estimule as células com agentes danificadores de DNA (por exemplo, etoposídeo, UV ou hidroxiureia) para induzir a fosforilação da Chk1 em S317 e melhorar a detecção do sinal.
• Valide o desempenho do anticorpo nas linhagens celulares humanas e sistemas de ensaio relevantes, pois a reatividade cruzada com outras espécies não foi documentada.
• Para aplicações de ELISA, utilize controles positivos e negativos apropriados para garantir a especificidade para o epítopo fosforilado.
• Considere otimizar a diluição do anticorpo e as condições de incubação para sua configuração experimental específica.

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