Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Phospho-Chk2-T68 para WB, ELISA - O96017

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Chk2

• Serina/treonina-proteína quinase Chk2 (CHEK2, CDS1, homólogo de RAD53) desempenha um papel crítico na parada do ciclo celular mediada por checkpoint, reparo de DNA e apoptose em resposta a quebras duplas de fita de DNA.
• Atua como supressor de tumor; também regula negativamente a progressão do ciclo celular durante ciclos não perturbados e pode contribuir para instabilidade cromossômica quando ausente.
• Após ativação, fosforila inúmeros efetores preferencialmente na sequência consenso [L-X-R-X-X-S/T].
  Referências relacionadas: PMID:37943659
• Regula a parada do checkpoint do ciclo celular ao fosforilar e inibir as fosfatases CDC25A, CDC25B e CDC25C, levando à fosforilação tirosina inibitória de complexos CDK-ciclina.
• Promove o reparo de DNA por meio da fosforilação de BRCA2 (potenciando a associação de RAD51 à cromatina) e estimulando a transcrição de genes de reparo de DNA via FOXM1.
• Medeia a apoptose por meio da fosforilação de p53/TP53 na Ser-20, MDM4 e PML, bem como através da transcrição dependente de E2F1 de genes pró-apoptóticos.
• Sob estresse oxidativo, fosforila TRIM32 na Ser-55 para promover a ubiquitinação de ATG7 e a montagem da autofagia.
  Referências relacionadas: PMID:37943659
• Promove a associação CCAR2-SIRT1 e é necessário para a inibição de SIRT1 mediada por CCAR2.
  Referências relacionadas: PMID:25361978
• Localiza-se predominantemente no núcleo (nucleoplasma, corpos PML); é altamente expressa em testículo, baço, cólon e leucócitos do sangue periférico, com menor expressão em outros tecidos.
• Contém domínios de quinase, ligação a ATP e ligação a nucleotídeos; classificada como fosfoproteína com papéis na mitose, regulação da transcrição e interação hospedeiro-vírus.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético ao redor de T68, o que indica especificidade para a forma fosforilada; use inibidores de fosfatase apropriados durante a preparação de amostras para preservar os sinais de fosforilação.
• Para Western blot, considere estimular células com agentes danificadores de DNA (por exemplo, etoposida, irradiação) para induzir a fosforilação de Chk2 antes da preparação do lisado.
• Valide o anticorpo em amostras humanas; bandas de fundo podem aparecer, sendo aconselhável otimizar as condições de carregamento e detecção.
• Para ELISA, o peptídeo fosforilado pode servir como antígeno de revestimento para confirmar a especificidade; recomenda-se o uso de controles negativos com peptídeo não fosforilado.
• Uma banda esperada próxima a 61 kDa deve ser observada em WB; bandas adicionais podem refletir variantes de splicing ou modificações pós-traducionais.

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