Anticorpo Policlonal Anti-Fosfo-DRP1-S616 para WB e ELISA - O00429

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Proteína Semelhante à Dinamina-1 (DNM1L)

• O DNM1L (também conhecido como DRP1, DLP1, DVLP, Dymple, HdynIV, proteína relacionada com a dinamina 1) é um membro da família da dinamina de grandes GTPases, codificada pelo gene DNM1L no cromossoma 12 humano. É expresso ubiquitariamente, com os níveis mais elevados no músculo esquelético, coração, rim e cérebro. Existem múltiplas isoformas: a isoforma 1 é específica do cérebro, a isoforma 2 predomina nos testículos, a isoforma 3 no músculo esquelético, a isoforma 4 é fracamente expressa no cérebro/coração/rim, a isoforma 5 no fígado/coração/rim e a isoforma 6 nos neurónios.
• A proteína medeia a divisão mitocondrial e peroxissomal ao oligomerizar em estruturas helicoidais que constroem e cortam as membranas de forma dependente da hidrólise de GTP (PubMed:11514614, PubMed:12499366, PubMed:17301055, PubMed:23530241, PubMed:23584531, PubMed:33850055). Referências relacionadas: PMID:11514614, PMID:12499366, PMID:17301055, PMID:23530241, PMID:23584531, PMID:33850055
• O recrutamento do DNM1L para os locais de cisão mitocondrial é promovido por recetores de membrana como MFF, MIEF1 e MIEF2 (PubMed:23283981, PubMed:23921378, PubMed:29899447). A hidrólise de GTP induz a dissociação dos recetores e permite que os filamentos se enrolem em anéis fechados que provavelmente cortam a membrana dupla (PubMed:29899447). Referências relacionadas: PMID:23283981, PMID:23921378, PMID:29899447
• Desempenha um papel essencial na fissão mitocondrial durante a mitose (PubMed:19411255, PubMed:26992161, PubMed:27301544) e atua a jusante do PINK1 para promover a fissão de forma dependente do PRKN (PubMed:32484300). Referências relacionadas: PMID:19411255, PMID:26992161, PMID:27301544, PMID:32484300
• O DNM1L é necessário para o desenvolvimento normal do cérebro, incluindo o cerebelo, e garante a sobrevivência de neurónios pós-mitóticos através da supressão de danos oxidativos (PubMed:17460227, PubMed:26992161, PubMed:27145208). Facilita a apoptose regulada durante o desenvolvimento durante a formação do tubo neural. Referências relacionadas: PMID:17460227, PMID:26992161, PMID:27145208
• A proteína contribui para a apoptose através da promoção da libertação de citocromo c e ativação de caspases, e é necessária para a necrose programada (PubMed:22265414). Regula também a dinâmica da membrana das vesículas sinápticas através da associação com BCL2L1 (PubMed:17015472, PubMed:23792689). Referências relacionadas: PMID:22265414, PMID:17015472, PMID:23792689
• A fosforilação rítmica em Ser-637 fornece controlo circadiano da produção de ATP mitocondrial (PubMed:29478834). Referências relacionadas: PMID:29478834
• A localização subcelular inclui o citoplasma, a membrana externa mitocondrial, os peroxissomas, o aparelho de Golgi, as fossetas revestidas de clatrina e as vesículas sinápticas. Cicla entre pools citosólicos e ligados à membrana.
• As modificações pós-traducionais incluem a fosforilação (por exemplo, Ser-616, Ser-637), a acetilação, a S-nitrosilação e a conjugação de ubiquitina, que regulam a sua atividade, estabilidade e interações.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo foi produzido contra um fosfo-peptídeo sintético correspondente à fosforilação da Ser-616 do DRP1 humano. Para aplicações de WB e ELISA, considere o uso de amostras onde se espera a fosforilação do DRP1 S616, como células em fissão mitocondrial ativa ou apoptose.
• Como um anticorpo específico para fosfo, inclua sempre inibidores de fosfatases nos tampões de lise e valide a especificidade através do tratamento com fosfatase ou bloqueio com peptídeo não fosforilado.
• Otimize a diluição do anticorpo e as condições de incubação no seu sistema de amostra relevante (por exemplo, HeLa, HEK293 ou lisados de tecidos); uma gama inicial típica para WB pode ser de 1:500–1:2000, mas o teste empírico é essencial.
• Para ELISA, confirme os protocolos de revestimento da placa e deteção com o seu antigénio; o peptídeo imunogénico pode servir como controlo positivo para avaliar o desempenho do ensaio.

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