Anticorpo Policlonal Anti-Fosfo-EGFR (T669) para WB, IP, ELISA - P00533

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do EGFR

• O EGFR é uma tirosina quinase receptora que se liga a ligantes da família EGF (EGF, TGFA, AREG, etc.), desencadeando a homo- ou heterodimerização do receptor e a autofosforilação em resíduos citoplasmáticos-chave, iniciando assim múltiplas cascatas de sinalização. Referências relacionadas: PMID:10805725, PMID:27153536, PMID:2790960, PMID:12297049, PMID:15611079, PMID:17909029
• O EGFR autofosforilado recruta proteínas adaptadoras como GRB2, ativando pelo menos quatro vias principais a jusante: RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCgama-PKC e módulos STAT, que regulam a proliferação, sobrevivência e migração celular. Referências relacionadas: PMID:27153536
• O EGFR fosforila diretamente outras proteínas de sinalização, como RGS16 (ativando sua atividade GTPase) e MUC1 (aumentando sua interação com SRC e beta-catenina), acoplando-se assim à sinalização de receptores acoplados à proteína G e aos processos de adesão celular. Referências relacionadas: PMID:11602604, PMID:11483589
• A fosforilação na treonina 669 (T669) é um evento regulatório crítico que modula a atividade quinase do EGFR e a sinalização a jusante, frequentemente associado à ativação do receptor e à transdução de sinais.
• A isoforma 2 do EGFR pode funcionar como um antagonista natural da ação do EGF, fornecendo uma camada adicional de regulação da sinalização.
• O EGFR também é explorado como um receptor de célula hospedeira para a entrada do vírus da hepatite C, facilitando a formação de complexos de receptores CD81-CLDN1.
• Subcelularmente, o EGFR está localizado na membrana celular, retículo endoplasmático, aparelho de Golgi, núcleo e endossomos, sendo que o tráfego entre os compartimentos influencia o resultado da sinalização.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético em torno de T669; para confirmar a especificidade da fosforilação, trate as amostras com fosfatase lambda e observe a perda de sinal no Western blot.
• Para WB, considere usar uma escada de proteínas de alta qualidade na faixa de 130-140 kDa e incluir controles de carga apropriados. Valide o anticorpo na sua linhagem celular alvo com expressão conhecida de EGFR.
• Em experimentos de IP, otimize a proporção anticorpo-lisado e confirme a imunoprecipitação bem-sucedida por meio de co-imunoprecipitação de interatores conhecidos do EGFR ou por blotting com um anticorpo pan-EGFR.
• Protocolos de ELISA podem exigir revestimento com o peptídeo fosforilado ou proteína de comprimento total; realize titulações em tabuleiro de xadrez para determinar as concentrações ótimas de anticorpo e antígeno.
• A reatividade cruzada é limitada ao EGFR humano; se trabalhar com amostras de rato ou camundongo, valide a reatividade cruzada experimentalmente ou considere reagentes específicos para a espécie.
• Como um anticorpo policlonal de coelho, use um anticorpo secundário anti-coelho apropriado para detecção; observe que lotes policlonais podem variar, portanto, titule cada novo lote.

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