Anticorpo Monoclonal Anti-Fosfo-EGFR-Y845 para WB, IF/ICC, ELISA - P00533

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do EGFR

• O EGFR (Receptor do Fator de Crescimento Epidérmico), também conhecido como ErbB-1 ou HER1, é um receptor tirosina quinase transmembrana pertencente à família ERBB. Uma isoforma com splicing alternativo (isoformaforma 2) pode funcionar como um antagonista da ação do EGF.
• Como um receptor tirosina quinase, o EGFR se liga a vários ligantes da família EGF e desencadeia cascatas de sinalização intracelular que convertem sinais extracelulares em respostas celulares apropriadas, incluindo proliferação, diferenciação e sobrevivência (PubMed:10805725, PubMed:27153536, PubMed:2790960). Referências relacionadas: PMID:10805725 PMID:27153536 PMID:2790960
• Ligantes conhecidos incluem EGF, TGFA/TGF-alfa, AREG, epigen/EPGN, BTC/betacelulina, epiregulina/EREG e HBEGF/EGF de ligação à heparina (PubMed:12297049, PubMed:15611079, PubMed:17909029). Referências relacionadas: PMID:12297049 PMID:15611079 PMID:17909029
• A ligação do ligante induz a homo- e/ou heterodimerização do receptor e a subsequente autofosforilação em tirosinas citoplasmáticas chave. A tirosina 845 fosforilada (Y845), localizada no loop de ativação do domínio da quinase, é crítica para estabilizar a conformação ativa e aumentar a atividade catalítica.
• A autofosforilação leva ao recrutamento de proteínas adaptadoras, como GRB2, ativando múltiplos módulos a jusante, incluindo RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCgamma-PKC, STATs e possivelmente NF-kappa-B (PubMed:11116146, PubMed:27153536). Referências relacionadas: PMID:11116146 PMID:27153536
• O EGFR fosforila diretamente outras proteínas, como RGS16 (ativando sua atividade GTPase) e MUC1 (aumentando sua interação com SRC e beta-catenina) (PubMed:11602604, PubMed:11483589). Referências relacionadas: PMID:11602604 PMID:11483589
• Regula positivamente a migração celular através da interação com CCDC88A/GIV, que retém o EGFR na membrana celular após a estimulação por ligante (PubMed:20462955). Referências relacionadas: PMID:20462955
• O EGFR localiza-se principalmente na membrana celular, mas também é encontrado no retículo endoplasmático, aparelho de Golgi, núcleo, endossomos e pode ser secretado em exossomos. É expresso ubiquamente, com a isoforma 2 notavelmente detectada em cânceres ovarianos.
• Além de seus papéis fisiológicos normais, o EGFR atua como um receptor de célula hospedeira para a entrada do vírus da hepatite C (HCV), mediando a formação do complexo de correceptor CD81-CLDN1 e aumentando a fusão da membrana viral.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Como este anticorpo reconhece um epítopo dependente de fosforilação, inclua inibidores de fosfatases nos tampões de lise e manuseie as amostras rapidamente em baixas temperaturas para preservar o sinal de fosforilação.
• Para western blot, espere uma banda principal em torno de 134 kDa. Para confirmar a especificidade fosfo, considere tratar lisados celulares com fosfatase lambda ou realizar ensaios de competição de peptídeo usando a contraparte não fosforilada do peptídeo imunógeno.
• Em imunofluorescência/ICC, é antecipado um padrão de coloração predominantemente associado à membrana; a coloração simultânea com um marcador de membrana plasmática pode ajudar a confirmar a localização.
• Para aplicações de ELISA, o anticorpo pode ser usado para capturar ou detectar EGFR fosforilado; otimize as condições de revestimento e detecção empiricamente.
• Validado para reatividade humana; para outras espécies, verifique a homologia da sequência em torno de Y845 e a reatividade cruzada experimentalmente.

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