Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Fosfo-eIF4EBP1-S65 para WB, ELISA - Q13541

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do eIF4EBP1

• O eIF4EBP1 (Proteína de ligação ao fator de iniciação da tradução eucariótica 4E 1), também conhecido como PHAS-I (proteína fosforilada regulada por insulina, estável ao calor e ácido 1), é um repressor chave da iniciação da tradução dependente de cap.
• Em seu estado hipofosforilado, o 4E-BP1 compete com o eIF4G pela ligação ao eIF4E, impedindo assim a montagem do complexo eIF4F e inibindo a tradução. A hiperfosforilação, como em Ser65, promove a dissociação do eIF4E, permitindo que a tradução dependente de cap prossiga.
• O 4E-BP1 integra sinais de fatores de crescimento, hormônios e nutrientes através das vias da quinase MAP e do mTORC1, sendo a fosforilação mediada pelo mTORC1 em múltiplos sítios (incluindo Thr37/46, Ser65 e Thr70) crítica para sua inativação.
• O 4E-BP1 pertence à família de proteínas de ligação ao eIF4E e compartilha um motivo conservado de ligação ao eIF4E (YXXXXLΦ) que interage diretamente com a superfície dorsal do eIF4E.
• A localização subcelular é principalmente citoplasmática, mas o 4E-BP1 pode se deslocar para o núcleo, onde pode regular a tradução nuclear ou outras funções. A dinâmica da fosforilação compartimentalizada pode variar.
• Além da fosforilação, o 4E-BP1 sofre acetilação, ubiquitinação (formação de ligação isopeptídica) e outras modificações pós-traducionais que ajustam finamente sua estabilidade e atividade, classificando-o como uma fosfoproteína e um alvo de conjugação do tipo ubiquitina.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogênio é um peptídeo fosforilado sintético ao redor da Ser65, portanto, espera-se que a reatividade do anticorpo seja fosfo-específica. Para ELISA, considere pré-incubar o anticorpo com um peptídeo não fosforilado para confirmar a especificidade fosfo.
• No western blotting, inclua a detecção do 4E-BP1 total (usando um anticorpo pan) para monitorar tanto os níveis totais de proteína quanto o estado de fosforilação. Use inibidores de fosfatase apropriados em tampões de lise.
• O anticorpo reconhece 4E-BP1 humano. Valide o desempenho em linhagens celulares humanas ou amostras de tecido; a reatividade com outras espécies não foi relatada, portanto, testes de reatividade cruzada são aconselhados se aplicado a amostras não humanas.
• Como um anticorpo policlonal de coelho, a consistência entre lotes deve ser monitorada; experimentos piloto com o lote específico são recomendados.

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