Anticorpo Policlonal Anti-Fosfo-eNOS-S1177 para WB, IHC-P, ELISA - P29474

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da eNOS

• A eNOS (Óxido nítrico sintase 3) é uma enzima expressa constitutivamente que catalisa a produção de óxido nítrico (NO), uma molécula de sinalização crítica envolvida no relaxamento do músculo liso vascular através de uma via mediada por GMPc e na angiogênese induzida por VEGF. Referências relacionadas: PMID:1378832
• O NO produzido pela eNOS também desempenha um papel na ativação plaquetária e na regulação da coagulação sanguínea.
• A enzima localiza-se na membrana plasmática, caveolas, citoplasma, citoesqueleto e aparelho de Golgi, refletindo sua regulação subcelular dinâmica.
• A eNOS é expressa em plaquetas, placenta, fígado e rins.
• O splicing alternativo gera uma isoforma dominante-negativa que carece de atividade de eNOS e pode regular negativamente a função da eNOS ao formar heterodímeros com a isoforma 1.
• As principais modificações pós-traducionais incluem a fosforilação em Ser1177 (o epítopo reconhecido por este anticorpo), bem como a miristoilação e a palmitoilação para ancoragem na membrana.
• A atividade da eNOS depende de cofatores como heme, FAD, FMN, NADP, calmodulina e metais como cálcio e zinco.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blotting, inclua controles apropriados (por exemplo, células endoteliais estimuladas versus não estimuladas) e inibidores de fosfatase para verificar a especificidade da fosforilação e evitar a desfosforilação.
• Em imuno-histoquímica (IHC-P), valide o anticorpo em cortes incluídos em parafina usando recuperação de antígeno e realize coloração paralela com um anticorpo anti-eNOS independente de fosforilação para avaliar a especificidade.
• Para aplicações de ELISA, o anticorpo pode ser usado para capturar ou detectar fosfo-eNOS (Ser1177) em lisados celulares ou preparações de proteínas recombinantes; considere usar um anticorpo anti-eNOS total para normalização.
• O peso molecular previsto da eNOS é de aproximadamente 133 kDa; use marcadores de peso molecular apropriados e porcentagens de gel para uma resolução clara.
• A reatividade cruzada foi relatada para humanos e camundongos; se utilizar outras espécies, realize um alinhamento de sequência para avaliar a conservação do epítopo e valide empiricamente a reatividade.

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