Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Phospho-FAK-Y925 para WB, ELISA - Q05397

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da FAK

• A quinase de adesão focal 1 (FAK/PTK2) é uma tirosina quinase não recetora que serve como regulador crítico da migração, adesão, espalhamento celular e reorganização do citoesqueleto de actina. Ela integra sinais de integrinas, recetores de fatores de crescimento e recetores acoplados à proteína G.
• A FAK sofre autofosforilação em Y397 após a ativação, criando um local de ligação de alta afinidade para quinases da família SRC. A subsequente fosforilação em Y925 promove o recrutamento de GRB2, ligando-se à cascata de sinalização MAP quinase/ERK e contribuindo para a proliferação e sobrevivência celular.
• A proteína localiza-se dinamicamente às adesões focais, à membrana celular, citoplasma perinuclear, córtex celular, centrossomo e núcleo. Esta distribuição permite o controlo espaciotemporal da transdução de sinais e da remodelação do citoesqueleto.
• A FAK fosforila múltiplos substratos, incluindo NEDD9 (melhorando a sinalização mediada por integrinas), BCAR1, GRB7 e o próprio SRC, modulando assim vias descendentes como as cascatas PI3K/AKT e Rho GTPase. Referências relacionadas: PMID:9360983
• O isoforma 6 (FRNK), uma variante com splicing alternativo que carece do domínio da quinase, atua como um inibidor endógeno bloqueando a fosforilação da FAK e a sinalização nuclear, atenuando a transcrição dependente de SRF.
• A FAK é expressa ubiquamente, com deteção notável em linfócitos B e T, fibroblastos pulmonares e células epiteliais. Referências relacionadas: PMID:31630787
• Modificações pós-traducionais, especialmente a fosforilação nos resíduos Y397, Y576, Y577, Y861 e Y925, regulam estritamente a atividade da FAK. A fosforilação em Y925 especificamente impulsiona a interação com GRB2 e a ativação da via MAPK, tornando-a um marcador chave para a sinalização da FAK em contextos de desenvolvimento e cancro.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio é um fosfopeptídeo sintético circundante à tirosina 925 da FAK humana; espera-se que o anticorpo reconheça a FAK apenas quando fosforilada neste local. Para uma especificidade ideal em WB, considere o uso de inibidores de fosfatases durante a preparação da amostra para preservar a fosforilação.
• Peso molecular previsto: ~119 kDa. Uma banda próximo deste tamanho em lisados de células humanas suporta a deteção, mas podem ocorrer bandas adicionais de isoformas ou modificações pós-traduccionais, pelo que deve comparar com controlos de FAK total.
• Para ELISA, inclua um controlo de peptídeo não fosforilado para confirmar a especificidade fosfo. Titule a concentração do anticorpo para minimizar o fundo e maximizar a relação sinal-ruído nas suas condições de ensaio específicas.
• Este produto tem reatividade documentada com amostras humanas; a reatividade cruzada com outras espécies é desconhecida. Valide o desempenho em qualquer sistema modelo não humano com controlos positivos e negativos apropriados.

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