Anticorpo Policlonico de Coelho Anti-Fosfo-IκBα (Ser36) para WB e ELISA - P25963

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de IκBα (Inibidor Alfa de NF-κB)

• IκBα (inibidor alfa de NF-κB), codificado pelo gene NFKBIA, é um regulador crítico da via de sinalização de NF-κB, funcionando principalmente para reter dímeros de NF-κB no citoplasma.
  Referências relacionadas:
  PMID:1493333, PMID:36651806, PMID:7479976

• Após estimulação por citocinas ou patógenos, IκBα é fosforilado nos resíduos de serina 32 e 36, o que o direciona para poliubiquitinação e degradação proteassomal, permitindo a translocação nuclear de NF-κB e a ativação gênica.
  Referências relacionadas:
  PMID:7479976, PMID:7628694, PMID:7796813

• A proteína contém múltiplas repetições de anquirina que mediam sua interação com as subunidades p65 e p50 de NF-κB, mascarando seus sinais de localização nuclear.

• IκBα trafega entre o citoplasma e o núcleo; pode entrar no núcleo para remover NF-κB do DNA e re-sequestrá-lo no citoplasma, garantindo respostas transcricionais transitórias.

• Modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, ubiquitinação, hidroxilação e formação de ligação isopeptídica, regulam rigidamente a estabilidade e a função de IκBα.

• Mutações em NFKBIA estão associadas à displasia ectodérmica com imunodeficiência (EDA-ID), destacando seu papel essencial no desenvolvimento e homeostase do sistema imunológico.

• Patógenos virais frequentemente direcionam IκBα para modular a sinalização de NF-κB, destacando seu envolvimento nas interações hospedeiro-vírus.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O anticorpo foi produzido contra um fosfopeptídeo sintético correspondente à Ser36 do IκBα humano; provavelmente detecta especificamente IκBα apenas quando fosforilado neste resíduo. Aconselha-se a validação da fosfo-especificidade usando tratamento com fosfatase ou competição com peptídeo não fosforilado.
• Para Western blot, estimule as células (por exemplo, com TNF-α ou IL-1β) para induzir uma forte fosforilação de IκBα. Pode ser necessário um experimento de curso de tempo para capturar a natureza transitória dessa modificação.
• Com base na similaridade de sequência, espera-se que o anticorpo reaja cruzadamente com o fosfo-IκBα de camundongo e rato. No entanto, recomenda-se verificar o alinhamento da sequência peptídica ao redor da Ser36 nessas espécies.
• Para aplicações de ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção no formato de ELISA sanduíche. Otimize empiricamente as condições de revestimento e detecção.
• Evite ciclos repetidos de congelamento-descongelamento; armazene o anticorpo a -20°C após o recebimento para manter sua atividade.

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