Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Fosfo-IRS1-S612 para WB, IHC-P, ELISA - P35568

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do IRS1

• O substrato do receptor de insulina 1 (IRS1) é uma proteína adaptadora de sinalização que medeia a transdução de sinais do receptor de insulina (INSR) e do receptor do fator de crescimento semelhante à insulina I (IGF1R), desempenhando um papel crítico no desenvolvimento, crescimento, homeostase da glicose e metabolismo lipídico. Referências relacionadas: PMID:7541045, PMID:33991522, PMID:38625937, PMID:19639489
• Após a fosforilação pelo receptor de insulina, o IRS1 funciona como um andaime de sinalização que propaga a ação da insulina ligando-se a proteínas contendo domínio SH2, incluindo a subunidade reguladora p85 da PI3K, NCK1, NCK2, GRB2 e SHP2. Referências relacionadas: PMID:11171109, PMID:8265614
• O recrutamento da GRB2 ativa a via Ras/Raf/MEK/MAPK, enquanto o recrutamento da PI3K desencadeia a via PI3K/AKT, coordenando respostas metabólicas e mitogênicas.
• O IRS1 atua como um regulador positivo da via de sinalização Wnt/beta-catenina, suprimindo a degradação mediada por autofagia da DVL2, promovendo assim a proliferação celular. Referências relacionadas: PMID:24616100
• A localização subcelular inclui o citoplasma e o núcleo.
• O IRS1 sofre extensas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, S-nitrosilação e ubiquitinação. Este anticorpo detecta especificamente a fosforilação na serina 612, um sítio regulador na sinalização do IRS1.
• Variações genéticas no IRS1 estão associadas à suscetibilidade ao diabetes mellitus.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético fosforilado em torno de S612; portanto, espera-se que o anticorpo reconheça especificamente o IRS1 fosforilado neste sítio. Para o western blot, considere confirmar a especificidade fosfo através do tratamento com fosfatase lambda ou ensaios de competição com peptídeo fosforilado.
• O peso molecular previsto do IRS1 é de aproximadamente 132 kDa. Ao realizar WB, use uma porcentagem de gel apropriada (por exemplo, SDS-PAGE a 8%) e otimize as condições de transferência para proteínas de alto peso molecular.
• A reatividade cruzada com camundongo e rato sugere conservação da sequência do epítopo; no entanto, recomenda-se a validação no sistema de amostra relevante.
• Para IHC-P, a recuperação de antígeno pode ser necessária, e a adição de inibidores de fosfatase durante o processamento do tecido pode ajudar a preservar a fosforilação. A diluição do anticorpo primário e a incubação devem ser otimizadas empiricamente.
• Em aplicações de ELISA, recomenda-se o revestimento com o peptídeo fosforilado, e a detecção pode ser realizada usando protocolos padrão de ELISA indireto.

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