Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Fosfo-mTOR-S2448 para WB, IF/ICC, ELISA - P42345

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Proteína Quinase Serina/Treonina mTOR

• A proteína quinase serina/treonina mTOR (MTOR, também conhecida como FRAP/FRAP1/FRAP2/RAFT1/RAPT1) é um regulador mestre de 289 kDa do metabolismo celular, crescimento e sobrevivência, integrando sinais hormonais, nutricionais e de estresse. Referências relacionadas: PMID:12087098 PMID:12150925 PMID:12150926
• O MTOR funciona como o núcleo catalítico de dois complexos distintos, mTORC1 e mTORC2, que diferem na composição de subunidades, regulação a montante e alvos a jusante. Referências relacionadas: PMID:15268862 PMID:15467718 PMID:18497260
• O mTORC1 ativado promove a síntese proteica ao fosforilar EIF4EBP1 para aliviar sua inibição de eIF4E, e ao fosforilar RPS6KB1/2 para impulsionar a fosforilação da proteína ribossomal S6 e o início da tradução. Referências relacionadas: PMID:12087098 PMID:12150925 PMID:12150926 PMID:24403073 PMID:29236692 PMID:18925875
• O mTORC1 estimula a síntese de lipídios e nucleotídeos ao ativar SREBF1/SREBP1 e CAD, respectivamente, coordenando a produção de macromoléculas para o crescimento celular. Referências relacionadas: PMID:23429703 PMID:23429704 PMID:23426360
• Em condições de suficiência de nutrientes, o mTORC1 suprime a autofagia ao fosforilar reguladores chave da autofagia, incluindo ULK1 (Ser‑758), DAP, RUBCNL e AMBRA1. Referências relacionadas: PMID:32561715 PMID:20537536 PMID:30704899 PMID:23524951 PMID:25438055
• O complexo mTORC2 fosforila quinases AGC, incluindo AKT em Ser‑473, PKC e SGK1, regulando a sobrevivência celular, proliferação e a reorganização do citoesqueleto de actina. Referências relacionadas: PMID:15268862 PMID:15467718 PMID:21376236 PMID:15718470 PMID:24670654
• O MTOR localiza-se dinamicamente a membranas lisossômicas, do retículo endoplasmático, de Golgi, mitocondriais e nucleares; a ativação do mTORC1 está estritamente acoplada ao seu recrutamento para a superfície lisossômica.
• O MTOR é amplamente expresso, com os níveis mais altos nos testículos, e é regulado por extensa fosforilação, acetilação e ubiquitinação.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético que abrange a Ser‑2448; portanto, o anticorpo reconhece o mTOR apenas quando fosforilado neste resíduo. Para o Western blot, trate as células com estímulos apropriados (por exemplo, fatores de crescimento, aminoácidos) e inclua inibidores de fosfatases nos tampões de lise para preservar a fosforilação.
• Para o Western blot da proteína mTOR de 289 kDa, use um gel de poliacrilamida de baixa porcentagem (por exemplo, 6–8%) e um tempo de transferência mais longo. Verifique a eficiência da transferência com um marcador pré-corado.
• Para imunofluorescência (IF/ICC), fixe as células com paraformaldeído, permeabilize adequadamente e use um tampão de bloqueio para reduzir a ligação inespecífica. Confirme a localização por co-coloração com marcadores lisossômicos se estiver estudando a ativação do mTORC1.
• As aplicações de ELISA podem envolver a revestimento com peptídeo ou proteína; valide as condições do ensaio (tampão de revestimento, agente de bloqueio, diluição do anticorpo) em sua matriz específica.

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