Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Phospho-NF-kB p65/RelA-S311 para WB, ELISA - Q04206

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Fator de Transcrição p65

• NF-kappa-B é um fator de transcrição pleiotrópico presente em quase todos os tipos celulares, atuando como ponto final de várias cascatas de transdução de sinal. Forma homo ou heterodímeros; o complexo heterodimérico RELA-NFKB1 é o mais abundante e atua como um ativador transcricional.
• RELA (p65) liga-se a sítios kappa-B em promotores de genes-alvo com afinidade e especificidade distintas dependentes do dímero, ativando diretamente a transcrição e também modulando indiretamente a acessibilidade da cromatina a outros fatores.
• Em células não estimuladas, os complexos NF-kappa-B são mantidos inativos no citoplasma pelos inibidores I-kappa-B. Após estímulo, o I-kappa-B é fosforilado por IKKs e degradado, liberando RELA para translocar para o núcleo e iniciar a expressão gênica.
• RELA está sujeito a extensas modificações pós-traducionais—incluindo fosforilação em múltiplos sítios (ex.: S311), acetilação, metilação e ubiquitinação—que regulam sua atividade, estabilidade e interações proteicas.
• Essencial para a expressão de genes de citocinas em células T, destacando seu papel crítico em respostas imunes adaptativas.
  Referências relacionadas: PMID:15790681
• Identificado como um fator de transcrição chave que governa a resposta ao interferon durante a infecção por SARS-CoV-2. Referências relacionadas: PMID:33440148
• A localização subcelular é predominantemente citoplasmática em condições de repouso devido ao mascaramento do sinal de localização nuclear pelo I-kappa-B; o acúmulo nuclear ocorre rapidamente após a ativação.
• Anotado com palavras-chave incluindo Fosfoproteína, Acetilação, Metilação, Conjugação Ubl, Ligação Isopeptídica e S-nitrosilação, refletindo a intrincada rede regulatória que controla este fator de transcrição mestre.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogênio, um peptídeo fosfo-sintético cobrindo a S311, é projetado para gerar anticorpos específicos para a forma fosforilada. Verifique a especificidade fosfo tratando lisados com fosfatase lambda antes do WB.
• Aplicações adequadas conforme fornecedor: WB e ELISA. Para WB, use 20–30 µg de lisado celular total e um tampão de bloqueio padrão; valide o tamanho da banda em torno de 60 kDa com controles positivos apropriados (ex.: células HeLa estimuladas com TNF-α).
• Para ELISA, considere revestir com o peptídeo fosforilado e usar sua contraparte não fosforilada como controle negativo para confirmar a ligação sítio-específica.
• Reage de forma cruzada com humano e camundongo; realize a validação inicial em linhagens celulares ou tecidos relevantes dessas espécies. A indução da sinalização do NF-kB com estímulos como TNF-α ou PMA/ionomicina é recomendada para aumentar os sinais de fosforilação.
• Evite a remoção agressiva da membrana (stripping) que possa alterar o estado de fosforilação; em vez disso, use tampões de baixo pH ou detergentes suaves se a reprovação for necessária.

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