Anticorpo Monoclonal Anti-Fosfo-NF-kB p65/RelA (S536) para WB, IF/ICC, ELISA - Q04206

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do NF-κB p65/RelA

• O RELA codifica o fator de transcrição p65 (também conhecido como subunidade p65 do fator nuclear NF-kappa-B), uma subunidade central do complexo NF-κB.
• O NF-κB é um fator de transcrição pleiotrópico que controla genes na inflamação, imunidade, crescimento celular, diferenciação, tumorigênese e apoptose, ativado por vários estímulos.
• O p65 forma homodímeros ou heterodímeros com outras proteínas Rel; o heterodímero RELA-NFKB1 é o mais abundante e ativa a transcrição.
• Em células em repouso, o NF-κB é retido no citoplasma por inibidores IκB; após a ativação, o IκB é degradado, liberando o NF-κB para se translocar ao núcleo e ligar-se ao DNA.
• A fosforilação na serina 536 (S536) no domínio de transativação aumenta a ativação transcricional e serve como marcador da ativação da via NF-κB.
• O p65 localiza-se tanto no núcleo quanto no citoplasma, realizando trânsito em resposta a sinais.
• O p65 sofre múltiplas modificações pós-traducionais (fosforilação, acetilação, metilação, ubiquitinação, S-nitrosilação) que regulam sua função.
• O p65 é essencial para a expressão de genes de citocinas em células T e regula a resposta ao interferon durante a infecção por SARS-CoV-2. Referências relacionadas: PMID:15790681, PMID:33440148

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético fosforilado ao redor de S536; considere o uso de um controle de peptídeo não fosforilado para confirmar a especificidade fosfo-específica em seu ensaio.
• Para western blot, espera-se uma banda principal ao redor de 65 kDa; valide a detecção em lisatos celulares estimulados versus não estimulados para confirmar a fosforilação dependente de ativação.
• Para imunofluorescência/ICC, inclua permeabilização adequada e considere a co-coloração com um anticorpo total de p65 ou marcador nuclear para visualizar a translocação.
• Os protocolos de ELISA podem utilizar este anticorpo para captura de fosfo-p65; otimize as condições de revestimento e detecção para a matriz de amostra específica.

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