Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Fosfo-NF-kB p65/RelA-S536 para WB, IF/ICC, ELISA - Q04206

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Fator de Transcrição p65

• A subunidade p65 do NF-kappa-B (RELA) é um fator de transcrição central da família NF-kappa-B, codificando uma proteína de 60 kDa (também conhecida como p65, NFKB3, CMCU, AIF3BL3) com papéis críticos nas respostas imune e ao estresse. Entrada UniProt Q04206.
• O complexo NF-kappa-B existe como homo- ou heterodímeros; o heterodímero RELA-NFKB1 (p50) é o mais abundante e funciona como um ativador transcricional ao se ligar a motivos de DNA κB específicos em promotores de genes.
• A ativação do NF-kappa-B envolve a fosforilação induzida por estímulo e a degradação dos inibidores IκB, liberando o complexo RELA para translocar do citoplasma para o núcleo. A fosforilação de RELA em Ser536, localizada no domínio de transativação, aumenta sua atividade transcricional e é uma característica da ativação canônica do NF-κB.
• A localização subcelular do RELA é rigidamente controlada: em células em repouso, está predominantemente no citoplasma ligado ao IκB; após indução, acumula-se no núcleo para modular a expressão de genes alvo. A imunofluorescência pode detectar a translocação nuclear como uma leitura da ativação da via.
• RELA é intensamente modificado por fosforilação, acetilação, metilação, S-nitrosilação e ubiquitinação, que ajustam finamente sua produção transcricional. É essencial para a expressão de citocinas em células T (PubMed:15790681) e para a resposta de interferon tipo I durante a infecção por SARS-CoV-2 (PubMed:33440148). Referências relacionadas: PMID:15790681 PMID:33440148
• O gene RELA codifica múltiplos isoformas, e sua atividade é modulada por interações com cofatores e remodeladores de cromatina, destacando camadas regulatórias complexas além da simples entrada nuclear.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Prepare lisados celulares ou de tecido com coquetéis de inibidores de protease e fosfatase para preservar a fosforilação em Ser536. Para Western blotting, separe as proteínas por SDS-PAGE e sonde com este anticorpo em uma diluição inicial verificada pelo usuário final; espera-se uma banda forte próxima a 60 kDa.
• Para imunofluorescência ou imunocitoquímica (IF/ICC), fixe as células com paraformaldeído a 4% e permeabilize adequadamente; use um tampão de bloqueio apropriado para minimizar a ligação inespecífica. Investigue a translocação nuclear do NF-kB p65 sob estímulos inflamatórios (por exemplo, tratamento com TNF-α) para validar o sinal fosfo-específico.
• Em aplicações de ELISA, considere usar um controle de bloqueio com peptídeo fosforilado para confirmar a detecção específica da fosforilação. Titular o anticorpo para determinar as concentrações ideais no contexto do seu ensaio específico.
• A dinâmica de fosforilação pode variar entre os tipos celulares; sempre inclua controles positivos e negativos (por exemplo, células estimuladas vs. não estimuladas) para interpretar os resultados com precisão.

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