Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-NF-kB p65/RelA (Ser468) para WB, IP, ELISA - Q04206

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do NF-kB p65/RelA

• O fator de transcrição p65 (RelA) é a subunidade p65 do complexo do fator de transcrição NF-kB, um fator pleiotrópico presente em quase todos os tipos de células, e serve como o ponto final para vias de transdução de sinal iniciadas por diversos estímulos relacionados à inflamação, imunidade, diferenciação, crescimento celular, tumorigênese e apoptose.
• O NF-kB funciona como um homodímero ou heterodímero de proteínas contendo o domínio Rel. A forma mais abundante é o heterodímero RELA-NFKB1 (p65-p50). Esses dímeros ligam-se a locais de DNA kappa-B com afinidades distintas, com os complexos RELA-NFKB1 e RELA-REL atuando como ativadores transcricionais.
• A atividade do NF-kB é regulada através de múltiplos mecanismos, incluindo modificações pós-traducionais, compartimentalização subcelular e interações com co-fatores ou corepressores. O NF-kB inativo é retido no citoplasma pelas proteínas inibidoras I-kB; após a fosforilação mediada por IKK e degradação do I-kB, o complexo NF-kB é liberado e transloca para o núcleo.
• RELA possui afinidade intrínseca de ligação ao DNA fraca, mas contribui para a capacidade de ligação ao DNA do complexo NF-kB. Ele também modula a acessibilidade da cromatina nos promotores alvo, influenciando indiretamente a expressão gênica.
• RELA é essencial para a expressão de genes de citocinas em células T, desempenhando um papel fundamental nas respostas imunes adaptativas. Referências relacionadas: PMID:15790681
• Durante a infecção por SARS-CoV-2, RELA atua como um fator de transcrição chave regulando a resposta ao interferon, destacando seu papel na imunidade inata antiviral. Referências relacionadas: PMID:33440148
• A nível subcelular, RELA transita entre o citoplasma e o núcleo. Ela está sujeita a extensas modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, metilação, fosforilação (por exemplo, em Ser468, visada por este anticorpo), S-nitrosilação e conjugação tipo ubiquitina, que modulam sua atividade, estabilidade e interações.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blot (WB), prepare lisados usando tampão RIPA suplementado com inibidores de proteases e fosfatases para preservar o sinal de fosforilação em Ser468. Realize SDS-PAGE e transferência, depois sonde com o anticorpo em uma diluição determinada empiricamente.
• Em experimentos de imunoprecipitação (IP), confirme que o nível de expressão da proteína alvo é suficiente no seu lisado celular ou de tecido. A origem do anticorpo de coelho e sua natureza monoclonal podem facilitar uma captura limpa com reagentes secundários de espécies correspondentes.
• Para detecção baseada em ELISA, considere usar o anticorpo como reagente de captura ou detecção, validando a linearidade e especificidade no seu sistema de ensaio com controles apropriados específicos para fosfo.
• Como o anticorpo apresenta reatividade cruzada com humano, camundongo e rato, ele pode ser usado para estudos comparativos entre essas espécies. No entanto, verifique sempre o desempenho incluindo controles positivos e negativos para cada espécie e condição de tratamento.
• Otimize a concentração do anticorpo para cada aplicação e tipo de amostra, pois as diluições recomendadas podem variar com as condições experimentais e métodos de detecção.

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