Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-NF-kB p65/RelA (Ser529) para WB, ELISA - Q04206

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do NF-kB p65/RelA

• NF-kB p65/RelA é uma subunidade do complexo fator de transcrição NF-kappa-B, que forma vários homo- e heterodímeros; o heterodímero RELA-NFKB1 é o mais abundante.
• NF-kB regula uma ampla gama de processos biológicos, como inflamação, imunidade, diferenciação celular e apoptose.
• No estado inativo, o NF-kB é retido no citoplasma por proteínas inibidoras I-kappa-B; após estímulo, a I-kappa-B é fosforilada e degradada, permitindo a translocação nuclear do NF-kB.
• A fosforilação em resíduos específicos, incluindo a Ser529, é uma modificação pós-traducional crucial que modula a atividade transcricional do RelA, sua ligação ao DNA e interação com cofatores.
• RelA é essencial para a expressão de genes de citocinas em células T.
  Referências relacionadas:
  PMID:15790681
• RelA funciona como um fator de transcrição chave regulando a resposta ao interferon durante a infecção por SARS-CoV-2.
  Referências relacionadas:
  PMID:33440148
• Subcelularmente, o RelA se desloca entre o citoplasma e o núcleo, um processo rigidamente controlado por fosforilação e ligação a inibidores.
• Está sujeito a múltiplas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação, metilação e ubiquitinação, que ajustam finamente sua atividade.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Como um anticorpo fosfo-específico, recomenda-se tratar as amostras com inibidores de fosfatase durante o preparo e verificar a especificidade do sinal por meio de controles de desfosforilação ou tratamento com estímulos relevantes.
• Para Western blotting, espera-se uma banda em aproximadamente 60 kDa para o RelA de comprimento total; no entanto, o peso molecular aparente pode variar devido a múltiplos eventos de fosforilação.
• Para aplicações de ELISA, o uso de um peptídeo imunogênico ou de um padrão de proteína fosforilada pode auxiliar na otimização das concentrações de revestimento e da sensibilidade de detecção.
• Testes de reatividade cruzada com espécies não humanas podem ser necessários se a sequência alvo for conservada, mas os dados de validação estão disponíveis apenas para amostras humanas.
• Sempre faça titulação do anticorpo em suas condições experimentais específicas para determinar as diluições de trabalho ideais.

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