Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Fosfo-NF-kB p65/RelA-T435 para WB e ELISA - Q04206

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do NF-kB p65/RelA

• Codificado pelo gene RELA, o NF-kB p65 (também conhecido como RelA) é uma subunidade do complexo do fator de transcrição NF-kB, que desempenha um papel central na regulação de respostas imunes, inflamação, proliferação celular e apoptose.
• O NF-kB funciona como um homodímero ou heterodímero; o heterodímero RELA-NFKB1 é a forma mais abundante, e o homodímero RELA-RELA também pode ativar a transcrição em promotores de genes alvo específicos.
• Em células não estimuladas, os dímeros de NF-kB são retidos no citoplasma por proteínas inibidoras de kB (IkB); upon stimulation, IkB é fosforilada por IKK e degradada, permitindo que o NF-kB se transloque para o núcleo e ative a expressão gênica.
• RELA é essencial para a expressão de genes de citocinas em células T, contribuindo para respostas imunes adaptativas. Referências relacionadas: PMID:15790681
• Foi identificado como um fator de transcrição chave que regula a resposta ao interferon durante a infecção por SARS-CoV-2. Referências relacionadas: PMID:33440148
• RELA está sujeita a extensas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação (por exemplo, em Thr435), acetilação, metilação e outras, que modulam sua atividade transcricional e interações.
• A proteína localiza-se principalmente no citoplasma em seu estado inativo e no núcleo após ativação, onde se liga ao DNA e recruta coativadores.
• O splicing alternativo e rearranjos cromossômicos envolvendo RELA foram associados a certas doenças, destacando sua importância tanto na fisiologia normal quanto na patologia.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno utilizado para gerar este anticorpo é um peptídeo sintético fosforilado ao redor de Thr435, portanto, ele reconhece especificamente a forma fosforilada de p65. Para WB, certifique-se de que os lisados celulares sejam preparados com inibidores de fosfatases para preservar o estado de fosforilação.
• Ao realizar ELISA, considere o uso de peptídeos fosforilados e não fosforilados para verificar a especificidade fosfo-específica do anticorpo.
• Para western blotting, espera-se uma banda ao redor de 60 kDa; valide usando controles positivos conhecidos por terem NF-kB ativado (por exemplo, células tratadas com TNF-alfa) e controles negativos (por exemplo, lisados não tratados ou tratados com fosfatase).
• O anticorpo é relatado como reativo com amostras humanas e de camundongo; a reatividade cruzada com outras espécies deve ser avaliada experimentalmente, se necessário.
• Otimize as diluições do anticorpo primário com base no seu sistema de amostra; pontos de partida típicos são 1:500-1:2000 para WB, mas as condições exatas podem variar.

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