Anticorpo Policlonado de Coelho Anti-Fosfo-NF-κB2-S866 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q00653

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização de NF-κB2 p100/p52

• NF-κB2 codifica a proteína precursora p100, que é processada proteoliticamente para gerar a subunidade ativa p52; a isoforma p49 também é expressa. p100 pode reter os complexos de NF-κB no citoplasma.
• NF-κB é um fator de transcrição pleiotrópico que regula a inflamação, a imunidade, a diferenciação celular, o crescimento, a tumorigênese e a apoptose.
• p52 forma homodímeros ou heterodímeros com outros membros da família NF-κB/Rel (RELA/p65, RELB, NFKB1/p50, REL) e se liga à sequência consenso κB 5'-GGRNNYYCC-3' nos enhancers dos genes alvo.
• O complexo heterodimérico RelB-p52 funciona como ativador transcricional, enquanto o homodímero p52-p52 atua como repressor.
• Na via não canônica de NF-κB, o homodímero CHUK/IKKA ativado por MAP3K14 fosforila p100 associado a RelB, desencadeando o processamento dependente de ubiquitina para p52 e a translocação nuclear.
• NF-κB2 é localizada tanto no citoplasma quanto no núcleo, com a compartimentalização subcelular e as modificações pós-traducionais (fosforilação, ubiquitinação) controlando rigidamente sua atividade.
• p52, em conjunto com RELB, regula o relógio circadiano ao reprimir a atividade de ativação transcricional do heterodímero CLOCK-BMAL1.
• Rearranjos cromossômicos envolvendo NFKB2 estão associados a certas neoplasias linfoides.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético que compreende Ser866; portanto, espera-se que o anticorpo reconheça especificamente NF-κB2 apenas quando fosforilada neste resíduo. Use inibidores de fosfatase durante a preparação da amostra para preservar a fosforilação.
• Para Western blotting, o peso molecular previsto de p100 é de ~97 kDa; no entanto, múltiplas bandas podem ser observadas devido a intermediários de processamento ou degradação. Recomenda-se a inclusão de controles positivos e negativos apropriados (por exemplo, lisados tratados com fosfatase).
• Para imunohistoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), pode ser necessário otimizar as etapas de recuperação de antígeno, permeabilização e bloqueio. O desempenho do anticorpo deve ser validado no tecido ou sistema celular relevante.
• Em aplicações de ELISA, o anticorpo fosfo-específico pode ser pareado com um anticorpo de captura que reconhece a NF-κB2 total para quantificar os níveis de proteína fosforilada.
• A reatividade cruzada com camundongo está confirmada, mas a reatividade com outras espécies não foi testada; aconselha-se validação adicional se usar amostras não humanas ou não de camundongo.

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