Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Fosfo-NFKB1-S893 para IF/ICC - P19838

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da NFKB1

• O NF-κB é um fator de transcrição pleiotrópico que regula uma ampla gama de processos biológicos, incluindo inflamação, imunidade, diferenciação, crescimento celular, tumorigênese e apoptose, sendo expresso em quase todos os tipos celulares.
• O gene NFKB1 codifica a proteína precursora p105, que desempenha funções duplas: atua como um fator de retenção citoplasmática para complexos NF-κB e sofre processamento cotraducional para gerar a subunidade ativa p50.
  Referências relacionadas: PMID:1423592
• A subunidade ativa p50 heterodimeriza principalmente com RELA/p65 para formar o complexo NF-κB transcricionalmente competente, que se liga à sequência de DNA consenso κB 5'-GGRNNYYCC-3' nas regiões intensificadoras de genes envolvidos nas respostas imunes e de fase aguda.
  Referências relacionadas: PMID:1740106, PMID:7830764
• Dependendo da composição do dímero, os complexos NF-κB podem atuar como ativadores transcricionais (por exemplo, p65-p50) ou repressores (por exemplo, homodímeros p50-p50), proporcionando um controle refinado sobre a expressão gênica.
• Em células não estimuladas, o NF-κB é sequestrado no citoplasma por proteínas inibidoras IκB; após ativação por diversos estímulos, o IκB é fosforilado e degradado, permitindo a translocação do NF-κB para o núcleo.
• A proteína NFKB1 está sujeita a extensas modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação, hidroxilação, S-nitrosilação e ubiquitinação, que regulam sua atividade, estabilidade e interações proteicas.
• A fosforilação na serina 893 (S893) ocorre dentro do domínio C-terminal, semelhante ao IκB, da p105, uma região que é tipicamente removida durante o processamento proteassomal para p50, sugerindo um papel regulatório na retenção citoplasmática ou na dinâmica de processamento da p105.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfo-peptídeo sintético correspondente aos resíduos ao redor de S893 da NFKB1 humana, indicando que o anticorpo reconhece especificamente a forma fosforilada da NFKB1 neste local.
• Para imunocitoquímica/imunofluorescência (ICC/IF), recomendamos o uso de protocolos de fixação e permeabilização apropriados que preservem o estado de fosforilação. A fixação com metanol ou paraformaldeído pode ser adequada; no entanto, teste com e sem inibidores de fosfatase.
• Verifique a especificidade do anticorpo pré-incubando-o com o imunógeno fosfo-peptídeo ou tratando as células com uma fosfatase antes da coloração.
• Observe que o local de fosforilação S893 reside no domínio C-terminal semelhante ao IκB da p105. Este domínio é degradado durante o processamento proteassomal que gera a subunidade madura p50. Portanto, espera-se que o anticorpo detecte a p105 fosforilada (~105 kDa) e não o produto p50 clivado.
• Como a reatividade cruzada foi demonstrada apenas para humanos, valide o anticorpo nas linhagens celulares ou tecidos humanos relevantes. Os níveis de expressão podem variar entre os tipos celulares e condições de estimulação.

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