Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-PAK2 (S20) para WB, ELISA - Q13177

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PAK2

• A serina/treonina-proteína quinase PAK2, também conhecida como PAK65, Gamma-PAK ou p58, é um membro da família das quinases ativadas por p21 (PAK).
• Atua como efetora a jusante das pequenas GTPases CDC42 e RAC1; a ligação leva à autofosforilação e ativação da quinase. Referências relacionadas: PMID:7744004
• Fosforila diversos substratos, incluindo a histona H4 para promover a montagem do nucleossomo, JUN para a proliferação induzida por EGF e MAPK4/6 para regular a polimerização de actina F. Referências relacionadas: PMID:21724829, PMID:21177766, PMID:21317288
• A clivagem mediada pela caspase gera PAK-2p34, que se transloca para o núcleo e promove a apoptose via sinalização JNK; também fosforila MKNK1 para reduzir a tradução celular. Referências relacionadas: PMID:12853446, PMID:16617111, PMID:9171063, PMID:15234964
• Se localiza no citoplasma, núcleo, região perinuclear e membrana, e exerce funções independentes de quinase na orientação do fuso mitótico quando associada a ARHGEF7 e GIT1. Referências relacionadas: PMID:19273597, PMID:19923322
• É expressa de forma ubíqua com níveis mais elevados no músculo esquelético, ovário, timo e baço; é modificada pós-traducional por acetilação, miristoilação e conjugação com ubiquitina.
• Também fosforila e inibe a CASP7, impedindo a apoptose. Referências relacionadas: PMID:21555521, PMID:27889207

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Como o imunógeno é um peptídeo fosforilado sintético ao redor da serina 20, espera-se que este anticorpo reconheça especificamente a PAK2 fosforilada em S20; considere usar inibidores de fosfatase na preparação de amostras para preservar a fosforilação.
• Para Western blot, valide em linhagens celulares humanas que expressam PAK2 e confirme a banda de ~58 kDa; a reatividade cruzada com camundongo e rato permite estudos nessas espécies, mas a homologia de sequência ao redor de S20 deve ser verificada.
• Em ELISA, use um controle de peptídeo não fosforilado para verificar a fosfo-especificidade.
• Inclua controles adequados (ex: lisados não tratados vs. tratados com fosfatase) para confirmar a dependência da fosforilação.
• As diluições de trabalho ideais devem ser determinadas empiricamente; comece com as recomendações do fabricante, se disponíveis.

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