Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Fosfo-PDHA1-S293 para WB e ELISA - P08559

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PDHA1

• O gene PDHA1 codifica a forma somática da subunidade alfa da piruvato desidrogenase E1, um complexo enzimático chave que conecta a glicólise citoplasmática à produção de energia mitocondrial.
• Juntamente com a PDHB, o heterotetrâmero E1 (α₂β₂) catalisa a descarboxilação do piruvato dependente de tiamina pirofosfato (TPP) e a subsequente acetilação redutiva do componente E2 ligado a lipoíla, uma etapa crítica na conversão de piruvato em acetil-CoA e CO₂. Referências relacionadas: PMID:17474719 PMID:19081061 PMID:7782287
• O complexo PDH se encontra na matriz mitocondrial, onde a PDHA1 está localizada para facilitar o acoplamento direto com o ciclo TCA.
• A PDHA1 é expressa de forma ubíqua em todos os tecidos humanos, o que é consistente com seu papel central no metabolismo da glicose.
• A proteína está sujeita a modificações regulatórias pós-traducionais, incluindo fosforilação em múltiplos resíduos de serina e acetilação, que modulam a atividade enzimática.
• Mutações associadas a doenças no gene PDHA1 estão ligadas à síndrome de Leigh e outras doenças mitocondriais primárias, destacando sua importância metabólica.
• Como membro da família da piruvato desidrogenase, a PDHA1 requer tiamina pirofosfato (derivado da vitamina B1) e magnésio como cofatores para sua atividade catalítica.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Este anticorpo foi desenvolvido contra um peptídeo fosforilado correspondente aos resíduos ao redor da Ser293 da PDHA1 humana. Para resultados ideais, recomendamos o uso de coquetéis de inibidores de fosfatase durante a lise de células/tecidos para preservar o epítopo fosforilado.
• No Western blotting, uma banda específica de aproximadamente 43 kDa (o peso molecular da PDHA1) deve ser detectável. Valide a especificidade tratando as amostras com lambda fosfatase ou usando bloqueio com peptídeo não fosforilado.
• Para aplicações de ELISA, recomendamos revestir as placas com o peptídeo imunógeno fosforilado como controle positivo e uma contraparte não fosforilada para confirmar a fosfo-especificidade.
• A reatividade cruzada é reportada para PDHA1 humana, de camundongo e rato; no entanto, é aconselhável verificar a reatividade no seu sistema de amostras, especialmente ao usar extratos de tecidos não humanos.

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