Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-PERK (T982) para WB, IHC-P, ELISA - Q9NZJ5

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PERK

• EIF2AK3/PERK é uma quinase sensora de estresse metabólico que fosforila eIF2-alfa (EIF2S1) na Ser51 em resposta ao estresse do retículo endoplasmático (RE), um passo central na resposta a proteínas mal enoveladas (UPR).
  Referências relacionadas: PMID:10026192, PMID:10677345, PMID:11907036
• A fosforilação de eIF2-alfa pela PERK inibe a tradução global dependente de capa, enquanto aumenta seletivamente a tradução de mRNAs responsivos ao estresse, como ATF4 e QRICH1, permitindo a reprogramação celular sob estresse.
  Referências relacionadas: PMID:10026192, PMID:10677345, PMID:31023583
• A UPR mediada pela PERK aumenta a fosforilação oxidativa mitocondrial, promovendo a expressão dependente de ATF4 de COX7A2L/SCAF1, o que aumenta a formação do supercomplexo da cadeia respiratória.
  Referências relacionadas: PMID:31023583
• A PERK é inibida nos locais de contato mitocôndria-RE pela ATAD3A, protegendo as mitocôndrias do desligamento translacional global da UPR.
  Referências relacionadas: PMID:39116259
• Além da eIF2-alfa, a PERK também fosforila NFE2L2/NRF2, desencadeando sua liberação da KEAP1 e subsequente acúmulo nuclear para ativar a expressão de genes antioxidantes.
• A PERK é uma proteína transmembrana residente no RE e é expressa de forma ubíqua, com níveis mais altos em tecidos secretores.
• A proteína tem um peso molecular de ~125 kDa e pertence à família das quinases de proteína Ser/Thr, com atividade de quinase de tirosina adicional.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo foi produzido contra um fosfopeptídeo sintético correspondente ao sítio de fosforilação Thr982 da PERK humana; ele reconhece especificamente a PERK fosforilada e não detectará a forma não fosforilada. Verifique a especificidade para fosfo em seu sistema experimental, por exemplo, através de tratamento com fosfatase.
• Para western blot (WB), espera-se uma banda de aproximadamente 125 kDa. Otimize o bloqueio e a diluição do anticorpo para minimizar a ligação inespecífica e considere carregar controles apropriados (por exemplo, lisados celulares induzidos por estresse vs. não estressados).
• Para imuno-histoquímica (IHC-P), as condições de recuperação de antígeno podem influenciar a coloração; valide com amostras de tecido positivas e negativas conhecidas e considere o uso de um protocolo de detecção específico para fosfo.
• O anticorpo tem reatividade cruzada com a PERK de camundongo e rato, permitindo estudos translacionais; no entanto, confirme a reatividade em suas linhagens celulares ou tecidos específicos, pois o estado de fosforilação pode variar.
• Para aplicações de ELISA, este anticorpo pode ser usado como reagente de detecção ou captura, mas as condições do ensaio (revestimento, bloqueio, método de detecção) devem ser otimizadas para detecção específica de fosfo.

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