Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Fosfo-PKC alfa-T638 para WB, ELISA - P17252

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da PKC alfa

• A proteína quinase C do tipo alfa (PKCα) é uma serina/treonina-proteína quinase dependente de cálcio, fosfolipídio e diacilglicerol (DAG) que regula diversos processos celulares, incluindo proliferação, apoptose, diferenciação, migração, adesão e angiogênese.
• A PKCα atua tanto na regulação positiva quanto negativa da progressão do ciclo celular; pode promover o crescimento via sinalização RAF1/MAPK/ERK ou induzir parada do ciclo celular através da hiperfosforilação de RB1 e indução de inibidores de CDK (CDKN1A, CDKN1B).
• A quinase exibe funções anti-apoptóticas em células cancerígenas ao suprir a ativação de IGFBP3 mediada por p53/TP53 e fosforilar BCL2, contribuindo assim para a promoção tumoral em gliomas e cânceres de mama.
• A PKCα desempenha um papel crítico na biologia cardiovascular: regula negativamente a contratilidade miocárdica, induz hipertrofia de cardiomiócitos via sinalização ERK1/2 e promove angiogênese ao aumentar a migração de células endoteliais e a proliferação induzida por VEGFA.
• Na função plaquetária, a PKCα media a liberação de grânulos dependente de CD36/GP4 e a ativação da integrina ITGA2B-ITGB3 através da via RAP1GAP, contribuindo para a formação de trombos.
• A quinase está envolvida em respostas imunes, incluindo diferenciação de macrófagos e migração de células T induzida por quimiocinas; fosforila DOCK8 para regular a ativação de CDC42. Referências relacionadas: PMID:28028151
• A localização subcelular da PKCα é dinâmica: é encontrada no citoplasma, membrana celular, membrana mitocondrial e núcleo, dependendo do status de ativação e dos estímulos.
• A PKCα fosforila uma ampla gama de substratos, incluindo TNNT2/CTNT (regulando a contratilidade cardíaca), KLHL3 (modulando a estabilidade de WNK4 em resposta à angiotensina II) e LRRK1 (envolvida no tráfego intracelular). Referências relacionadas: PMID:25313067 PMID:36040231

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um fosfopeptídeo sintético abrangendo a Thr638 da PKCα humana; a especificidade do anticorpo para a forma fosforilada deve ser validada comparando sinais em amostras tratadas com fosfatase versus não tratadas.
• Para Western blot, considere usar géis SDS-PAGE de baixa porcentagem para separar a proteína de 77 kDa, e incluir controles de carga apropriados juntamente com anticorpos PKCα não fosfo-específicos para avaliar os níveis totais de proteína.
• Em aplicações de ELISA, investigue empiricamente as concentrações do antígeno de revestimento e as condições de bloqueio; um ensaio de competição com fosfopeptídeo pode ajudar a confirmar a ligação fosfo-específica.
• Como a ativação da PKCα é transitória e dependente de estímulo, otimize os protocolos de estimulação celular (por exemplo, PMA, fatores de crescimento) e garanta o preparo oportuno das amostras com inibidores de fosfatase.

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